Buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit Genomesch DNA Extraktioun oder Purifiaction Kit aus Buccal Swabs
Kit Beschreiwung:
Séier qualitativ héichwäerteg genomesch DNA aus buccale Swab / FTA Card Proben ze purifizéieren.
◮Keng RNase Kontaminatioun:D'DNA-Nëmme Kolonn, déi vum Kit zur Verfügung gestallt gëtt, mécht et méiglech d'RNA aus der genomesch DNA ze läschen ouni RNase während dem Experiment ze addéieren, verhënnert datt de Laboratoire kontaminéiert gëtt duerch exogen RNase.
◮Schnell Geschwindegkeet:Foregene Protease huet méi héich Aktivitéit wéi ähnlech Proteasen, a verdaut Tissueproben séier;d'Operatioun ass einfach, an d'genomesch DNA Extraktioun Operatioun kann bannent 20-80 Minutten ofgeschloss ginn.
◮Confortabel:D'Zentrifugatioun gëtt bei Raumtemperatur duerchgefouert, an et ass kee Besoin fir 4 ° C Tieftemperatur-Zentrifugerung oder Ethanol-Nidderschlag vun DNA.
◮Sécherheet:Keng organesch Reagensextraktioun ass erfuerderlech.
◮Héich Qualitéit:Déi extrahéiert genomesch DNA huet grouss Fragmenter, keng RNA, keng RNase, an extrem nidderegen Ionengehalt, wat den Ufuerderunge vu verschiddenen Experimenter erfëllen kann.
◮Mikro-Elutiounssystem:Et kann d'Konzentratioun vu genomesch DNA erhéijen, wat bequem ass fir Downstream Detektioun oder Experiment.
Beschreiwung
Dëse Kit bitt eng effizient a séier Method fir héichkonzentréiert genomesch DNA aus buccale Schwammen a FTA Kaart (Bluttflecken) ze kréien.Benotzt eis Firma's eenzegaarteg DNA-nëmmen Silica Membran Spin Kolonn a Formel, kombinéiert mat Foregene Protease, héich-Konzentratioun, héich-Qualitéit genomic DNA kann an 80 Minutten extrahéiert ginn.Déi speziell entworf kleng Reinigungskolonne bindt genomesch DNA, an d'DNA kann mat enger klenger Quantitéit eluéiert ginn (15μl) Elutiounssystem fir d'Konzentratioun vun der kritt genomescher DNA ze erhéijen, wat bequem ass fir Downstream Detektioun oder Experiment.De Kit kann een oder méi Proben gläichzäiteg veraarbechten, an de Reinigungsprozess erfuerdert keng Extraktioun vun organesche Substanzen wéi Phenol, Chloroform, an Zäitopwänneg Isopropanol oder Ethanol Nidderschlag, an d'Operatioun ass einfach an Zäitspuerend.
Spezifikatioune
50 Préparatiounen
Kit Komponente
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| Linear Acrylamid |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Virdrun Protease |
| DNA-Nëmmen Kolonn |
| Uweisungen |
Fonctiounen & Virdeeler
-Keng RNase Kontaminatioun: D'DNA-Nëmme Kolonn, déi vum Kit zur Verfügung gestallt gëtt, mécht et méiglech RNA aus genomesch DNA ze läschen ouni RNase wärend dem Experiment derbäi ze ginn, vermeit datt de Laboratoire kontaminéiert gëtt duerch exogen RNase.
-Schnell Geschwindegkeet: Foregene Protease huet méi héich Aktivitéit wéi ähnlech Proteasen, verdaut Proben séier;einfach Operatioun.
-Convenient: D'Zentrifugatioun gëtt bei Raumtemperatur duerchgefouert, an et ass kee Besoin fir 4 ° C Tieftemperatur-Zentrifugéierung oder Ethanol-Nidderschlag vun DNA.
-Sécherheet: Keng organesch Reagensextraktioun ass erfuerderlech.
-Héich Qualitéit: Déi extrahéiert genomesch DNA huet grouss Fragmenter, keng RNA, keng RNase, an extrem nidderegen Ionengehalt, wat den Ufuerderunge vu verschiddenen Experimenter erfëllen kann.
-Mikro-Elutiounssystem: Et kann d'Konzentratioun vu genomesch DNA erhéijen, wat bequem ass fir Downstream Detektioun oder Experiment.
Kit Applikatioun
Et ass gëeegent fir d'Reinigung vun der genomescher DNA aus de folgende Proben: buccale Swabs, FTA Kaart (Bluttflecken).
Stockage an Regal Liewen
-Dëse Kit kann fir 12 Méint ënner dréchen Konditiounen bei Raumtemperatur (15-25 ° C) gespäichert ginn;wann et méi laang muss gespäichert ginn, kann et bei 2-8°C gelagert ginn.
Bemierkung: Wann d'Léisung bei niddreger Temperatur gelagert gëtt, ass d'Léisung ufälleg fir Nidderschlag.Virum Gebrauch, gitt sécher d'Léisung am Kit fir eng Zäit bei Raumtemperatur ze setzen.Wann néideg, virhëtzt et an engem 37 ° C Waasserbad fir 10 Minutten fir de Nidderschlag opzeléisen, a vermëschen et virum Gebrauch.
-Foregene Protease Léisung huet eng eenzegaarteg Formel, déi aktiv ass wann se laang bei Raumtemperatur gelagert ginn (3 Méint);seng Aktivitéit a Stabilitéit wäerte besser sinn wann se bei 4 ° C gespäichert sinn, dofir ass et recommandéiert et bei 4 ° C ze späicheren, erënnert net datt se op -20 ° C halen.
D'Reinigungskolonne ass verstoppt
An dësem Kit, an der genomescher DNA Extraktioun Operatioun, gëtt d'Reinigungskolonn direkt op der Probe enzymatesch Lysismëschung adsorbéiert ouni Zentrifugéierungsschrëtt, an d'Reinigungskolonn kann blockéiert ginn wéinst onkomplett Enzymiséierung an héijer Viskositéit vun der Probe.
Déi folgend méiglech Ursaachen sinn wéi follegt:
1. Onkomplett enzymatesch Verdauung vun Tissueproben.
Recommandatioun: D'Probeveraarbechtungszäit vu Foregene Protease kann entspriechend verlängert ginn oder de Supernatant kann no der Zentrifugéierung bei 12.000 RPM (~ 13.400 × g) fir 5 min geholl ginn.
2. Exzessiv Notzung vun Tissueproben oder grouss Stoffer.
Recommandatioun: Et ass am beschten net méi wéi 1 Buccal Swab an der Probe ze iwwerschreiden;Wann d'Probe ze grouss ass, erhéicht d'Doséierung vum Buffer ST1, Foregene Protease, Puffer ST2 entspriechend.
3. D'Probe Viskositéit ass ze héich.
Empfehlung: Echantillon kënne mat 10 mM Tris-HCl adequat verdünnt ginn virum genomeschen DNA Extraktioun.
4. Fragmenter vun der Blutkaart goufen gesuckelt.
Empfehlung: D'transient Zentrifugéierungszäit vum Schrëtt 6 vu Bluttflecken (FTA Card) genomesch Extraktioun kann entspriechend verlängert ginn.
Niddereg Ausbezuele oder keng DNA
Et ginn dacks eng Vielfalt vu Faktoren, déi den genomesche DNA Ausbezuele beaflossen, dorënner Prouforigin, Probelagerungsbedéngungen, Probepräparatioun, Manipulatioun, etc.
Genomesch DNA kann net während der Extraktioun kritt ginn
Déi méiglech Ursaachen sinn wéi follegt:
1. Ongerecht Konservatioun vu Proben oder Lagerung fir ze laang féiert zu genomesch DNA Degradatioun.
Recommandatioun: Oral Swabs sollten am léifsten frësch gepréift ginn, an et ass net unzeroden konservéiert Swabs fir genomesch DNA Extraktiounsoperatiounen ze benotzen;Blutt Fleck Echantillon soll sécherstellen, datt d'Qualitéit qualifizéiert ass an der Stockage Zäit soll net ze laang sinn.
2. Ze wéineg Tissuverbrauch kann zu keng Extraktioun vun der entspriechender genomesch DNA féieren.
Recommandatioun: Follegt d'buccal Swab Sampling Instruktiounen am Operatiounsguide, a wëschen esou oft wéi méiglech, sou datt genuch Zellen un de mëndleche Swab befestegt kënne ginn fir genomesch DNA Extraktioun;fir Bluttfleckenproufextraktioun kann d'Bluttfleckenschneidfläch passend erhéicht ginn.
3. Foregene Protease ass falsch konservéiert, wat zu enger Ofsenkung vun hirer Aktivitéit oder Inaktivéierung resultéiert.
Recommandatioun: Bestätegt d'Späicherkonditioune vum Foregene Protease oder ersetzt se mat engem neie Foregene Protease fir enzymatesch Reaktioun.
4. Ongerechte Konservatioun vum Kit oder d'Späicherzäit ass ze laang, wat zu engem Ausfall vun e puer Komponenten am Kit resultéiert.
Recommandatioun: Kaaft en neie Buccal Swab DNA Isolatiounskit fir verwandte Prozeduren.
5. Buffer WB gëtt net absolut Ethanol.
Recommandatioun: Bestätegt datt de Puffer WB de richtege Volumen vun absoluten Ethanol bäidréit.
6. D'Eluent gëtt net korrekt an de Silikonfilm hinzugefügt.
Recommandatioun: Füügt 65 ° C virgewiermte Eluentdrëpsen an d'Mëtt vun der Silikonmembran a léisst bei Raumtemperatur fir 5 min fir d'Elutiounseffizienz ze erhéijen.
Low-yield genomesch DNA isoléiert
Déi folgend méiglech Ursaachen sinn wéi follegt:
1. Ongerecht Konservatioun vu Proben oder Lagerung fir ze laang féiert zu genomesch DNA Degradatioun.
Recommandatioun: Oral Swabs ginn am léifsten frësch gepréift, a konservéiert Swabs sollten net fir genomesch DNA Extraktioun benotzt ginn.
2. Wann d'Quantitéit vum Tissueprobe ze kleng ass, gëtt den extrahéierten genomesche DNA Inhalt manner.
Recommandatioun: Follegt d'mëndlech Swab Sampling Instruktiounen am Operatiounsguide, wëschen esou oft wéi méiglech, sou datt genuch Zellen un de mëndleche Swab fir genomesch DNA Extraktioun befestegt kënne ginn.
3. Foregene Protease ass falsch konservéiert, wat zu enger Ofsenkung vun hirer Aktivitéit oder Inaktivéierung resultéiert.
Recommandatioun: Bestätegt d'Späicherkonditioune vum Foregene Protease oder ersetzt se mat engem neie Foregene Protease fir enzymatesch Reaktioun.
4. Eluent Problemer.
Recommandatioun: Benotzen Buffer EB fir elution;wann Dir ddH benotzt2O oder aner Eluenter, bestätegen datt de pH vum Eluat tëscht 7,0-8,5 ass.
5. D'Eluat gëtt net richteg drop gesat.
Recommandatioun: Füügt d'Eluentdrëpsen an d'Mëtt vun der Silikonmembran a léisst bei Raumtemperatur fir 5 min fir d'Elutiounseffizienz ze erhéijen.
6. D'Elutiounsflëssegkeet accumuléiert ze wéineg.
Recommandatioun: Benotzt Eluent fir genomesch DNA Elutioun wéi néideg an den Instruktiounen, op d'mannst net manner wéi 15 μl.
Niddereg Rengheet vu genomesch DNA isoléiert
Niddereg genomesch DNA Rengheet kann zu Echec oder onzefriddenen Resultater vun Downstream Experimenter féieren, sou wéi: Enzyme kënnen net opgeschnidde ginn, PCR kann d'Genfragment vum Interesse net kréien, etc.
Déi méiglech Ursaachen sinn wéi follegt:
1. Heteroprotein Pollutioun, RNA Pollutioun.
Analyse: D'Rengungskolonne gouf net mat Buffer PW gewäsch;de Buffer PW Wäschreinigungskolonne gouf net mat der korrekter Zentrifugalgeschwindegkeet gewäsch.
Recommandatioun: Vergewëssert Iech datt et kee Nidderschlag am Supernatant ass ier Ethanol bäigefüügt gëtt;gitt sécher d'Reinigungskolonne no den Instruktiounen ze wäschen, an dëse Schrëtt kann net ausgelooss ginn.
2. Gëftstoffer Ion Verschmotzung.
Analyse: Buffer WB Wäschreinigungskolonne gouf ausgeliwwert oder nëmmen eemol gewascht, wat zu enger verbleiwen ionescher Kontaminatioun resultéiert.
Recommandatioun: Ginn sécher de Buffer WB 2 Mol ze wäschen wéi virgesinn fir d'Ionen sou vill wéi méiglech ze läschen.
3. RNA Enzym Kontaminatioun.
Analyse: Auslänner RNases goufen zu Puffer dobäi;Buffer PW wäschen Operatioun war falsch, doraus zu RNase Reschter, Afloss downstream RNA experimentell Operatiounen, wéi in vitro Transkriptiouns.
Recommandatioun: Foregene Serie Nukleinsäure Isolatioun Kits kënnen RNA ouni zousätzlech Zousatz vun RNase ewechhuelen, sou datt buccal Swab / FTA Card DNA Isolation Kit brauch net RNase ze addéieren;gitt sécher op d'Instruktioune fir Buffer PW Wäschreinigungskolonne ze verfollegen, an dëse Schrëtt kann net ausgelooss ginn.
4. Ethanol Rescht.
Analyse: Buffer WB huet keng eidel Röhre Zentrifugerung gemaach nodeems d'Reinigungskolonne wäscht.
Recommandatioun: Maacht déi richteg eidel Röhre Zentrifugerungsoperatioun no den Instruktiounen.
5. Aner Gëftstoffer Verschmotzung.
Analyse: Gespäichert Proben oder speziell Proben ginn net virbehandelt.
Empfehlung: grëndlech virbehandelen d'Probe wéi uginn.
