Zell Total RNA Isolatioun Kit Total RNA Isolatioun Purification Kits aus Zell
Kit Beschreiwung:
Héich gereinegt a qualitativ héichwäerteg total RNA kann aus verschiddene kultivéierten Zellen an 11 Minutten kritt ginn.
RNase-Free
Operéiert bei Raumtemperatur (15-25 ℃)
Mat DNA-Cleaning Kolonn
Héich RNA Ausbezuele
Schnell: Fäerdeg Extraktioun an 11 Minutten
Sécherheet: Keen Organesch Chemikalien
Beschreiwung
Dëse Kit benotzt d'Spin Kolonn an d'Formel entwéckelt vu Foregene, déi effizient héich Rengheet a qualitativ héichwäerteg total RNA aus Zellen, déi an 96, 24, 12 a 6-Well Platen kultivéiert sinn, extrahéieren.
De Kit bitt eng effizient DNA-Cleaning Column, déi den Supernatant an d'Zelllysat einfach trennen, genomesch DNA binden an ewechhuelen.D'Operatioun ass einfach an Zäitspuerend.
Thien RNA-nëmmen Kolonn kann RNA effizient mat enger eenzegaarteger Formel binden.Eng grouss Zuel vu Proben kënne gläichzäiteg veraarbecht ginn.
Kit Komponente
| Kit Zesummesetzung | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24ml | 96ml |
| RNase-Free ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| RNA-Nëmmen Kolonn | 50 | 200 |
| DNA-Botzen Kolonn | 50 | 200 |
| Uweisunge | 1 | 1 |
* Maacht w.e.g. Handschuesch an huelt Schutzmoossname wärend der Operatioun well Buffer cRL1 a Buffer RW1 irritéierend chaotropesch Salze enthalen.
Fonctiounen & Virdeeler
■ De ganze Prozess gëtt bei Raumtemperatur (15-25 ℃) bedriwwen, ouni Äisbad an Tieftemperatur Zentrifugéierung.
■ De ganze Kit ass RNase-Free, keng Suergen iwwer RNA-Degradatioun.
■ DNA-Cleaning Column bindt speziell DNA, sou datt de Kit genomesch DNA Kontaminatioun ewechhuelen kann ouni zousätzlech DNase ze addéieren.
■ Héich RNA Ausbezuele: RNA-nëmmen Kolonn an eenzegaarteg Formel kann RNA effizient purifizéieren.
■ Schnellgeschwindegkeet: einfach ze bedreiwen a kann an 11 Minutten ofgeschloss ginn.
■ Sécherheet: Keen organesche Reagens ass erfuerderlech.
■ Héich Qualitéit: De gereinegt RNA ass vu héijer Rengheet, fräi vu Proteinen an aner Gëftstoffer, a ka verschidde spéider Experimenter treffen.
Kit Applikatioun
Et ass gëeegent fir Extraktioun a Reinigung vun total RNA aus kultivéierten Zellen an 96, 24, 12, a 6-Well Placken.
Aarbecht Flux
Diagramm
D'Agarose Gel Batterie Diagramm vun Zell Total RNA Isolatioun Kit behandelt der uewen verschidden Zuelen vun Zellen, 20μl Volume elution, huelen 2μl gereinegt Ganzen RNA 1%.
Stockage an Regal Liewen
De Kit kann fir 12 Méint bei Raumtemperatur (15-25 ℃) oder 2-8 ℃ fir méi Zäit (24 Méint) gelagert ginn.
Buffer cRL1 ka bei 4 ℃ fir 1 Mount gespäichert ginn nodeems 2-Hydroxy-1-Ethanethiol (optional) bäigefüügt ginn.
RNA gëtt net extrahéiert oder d'RNA Ausbezuele si niddereg
Et ginn dacks eng Vielfalt vu Faktoren déi d'Erhuelungseffizienz beaflossen, sou wéi: Tissueprobe RNA Inhalt, Operatiounsmethod, Elutiounsvolumen, asw.
1. Eisbad oder kryogen (4 ° C) Zentrifugéierung gouf während der Operatioun gemaach.
Recommandatioun: Bedreiwen bei Raumtemperatur (15-25 ° C) duerch de ganze Prozess, net Äisbad an centrifuge bei niddregen Temperaturen.
2. Ongerecht Probekonservatioun oder exzessiv Prouflagerzäit.
Empfehlung: Echantillon bei -80 ° C stockéieren oder a flëssege Stickstoff afréieren a widderholl Frost-Thaw benotzen;probéiert frësch Tissue oder kultivéiert Zellen fir RNA Extraktioun ze benotzen.
3. Net genuch Prouf Lysis.
Empfehlung: Wann Dir Tissue homogeniséiert, gitt sécher datt den Tissu genuch homogeniséiert ass an datt d'Tissuezellen genuch gespléckt sinn fir d'Verëffentlechung vu RNA z'erklären.
4. D'Eluent gëtt net korrekt dobäigesat.
Recommandatioun: Bestätegt datt RNase-Free ddH2O gëtt dropweis an d'Mëtt vun der Reinigungskolonnemembran bäigefüügt.
5. De richtege Volumen vum absolute Ethanol gouf net op Buffer RL2 oder Buffer RW2 bäigefüügt.
Recommandatioun: Follegt d'Instruktioune, fügen d'korrekt Volumen vun absoluten Ethanol un de Buffer RL2 a Buffer RW2 a mëschen gutt ier Dir de Kit benotzt.
6. Tissue Prouf Doséierung ass net passend.
Empfehlung: Benotzt 10-20 mg Tissu oder (1-5) × 106Zellen pro 500 μl Puffer RL1, well exzessiv Tissueverbrauch kann zu enger reduzéierter RNA Extraktioun resultéieren.
7. Ongerechte Elutiounsvolumen oder onvollstänneg Eluéierung.
Empfehlung: D'Elutiounsvolumen vun der Reinigungskolonne ass 50-200 μl;Wann d'Elutiounseffekt net zefriddestellend ass, ass et recommandéiert d'Raumtemperatur Plazéierungszäit ze verlängeren nodeems de virgehëtzten RNase-Free ddH bäigefüügt ass.2O, zB fir 5-10 min.
8.The Purification Kolonn huet Ethanol Reschter no Buffer RW2 wäschen.
Recommandatioun: Wann et Ethanol Reschter no Buffer RW2 wäschen ass, eidel Rouer centrifugation fir 1min, d'Zäit fir déi eidel Rouer centrifugation Operatioun kann zu 2min erhéicht ginn, oder d'Rengung Kolonn kann bei Raumtemperatur fir 5 min plazéiert ginn adäquat ewechzehuelen de Rescht Ethanol.
Purifizéiert RNA gëtt ofgebaut
D'Qualitéit vun der gereinegt RNA ass verbonne mat Faktoren wéi d'Erhaalung vun der Probe, RNase Kontaminatioun, a Manipulatioun, asw.
1. Tissue Echantillon ginn net an der Zäit gehal.
Empfehlung: Wann Tissueproben oder Zellen net fristgerecht no der Sammlung benotzt ginn, cryopreserve direkt bei -80 °C oder flëssege Stickstoff.Fir RNA ze extrahieren, benotzt eng nei geholl Tissu- oder Zellprobe wann ëmmer méiglech.
2. Widderhuelend Afréiere-Tauung vun Tissueproben.
Recommandatioun: Wann Dir Tissueproben späichert, ass et am beschten se a kleng Stécker ze schneiden fir ze konservéieren, an ee vun de Stécker ze läschen wann Dir se benotzt fir widderholl Gefrier-Daching vun der Probe an d'Degradatioun vun der RNA ze vermeiden.
3. RNase gëtt agefouert oder net ewechzegeheien Handschuesch, Masken, etc.. während der Operatioun.
Empfehlung: RNA Extraktiounsexperimenter ginn am beschten an getrennten RNA Manipulatiounsraim gemaach an den Dësch gëtt virum Experiment geläscht.
Drot disposéierbar Handschuesch a Masken wärend dem Experiment fir d'RNA-Degradatioun ze minimiséieren déi duerch d'Aféierung vun RNase verursaacht gëtt.
4. Reagens gi kontaminéiert mat RNase während der Benotzung.
Recommandatioun: Ersetzen mat engem neien Animal Total RNA Isolation Kit fir ähnlech Experimenter.
5. D'Zentrifugerröhren, Tipps, etc., déi an der RNA-Manipulatioun benotzt ginn, sinn kontaminéiert mat RNase.
Empfehlung: Bestätegt datt d'Zentrifugerröhren, Tipps, Pipetten, asw.
Purifizéiert kritt RNA beaflosst downstream Experimenter
RNA gereinegt vun der Reinigungskolonne, wann d'Salzionen, de Proteingehalt ze grouss ass, beaflosst den Downstream Experiment, sou wéi: ëmgedréint Transkriptioun, Northern Blot et al.
1. Déi eluéiert RNA huet Salzionreschter.
Recommandatioun: Bestätegt datt de richtege Volumen vun Ethanol op de Buffer RW2 bäigefüügt gouf a 2 Reinigungskolonnewäschen op der Zentrifugalgeschwindegkeet fir Operatioun uginn;wann et e Salz Ionreschter ass, loosst d'Reinigungskolonne op de Buffer RW2 fir 5 min bei Raumtemperatur an fuert Zentrifugatioun fir d'Ewechhuele vu Salzkontaminatioun ze maximéieren.
2. Ethanol Rescht an elutioned RNA.
Empfehlung: Bestätegt datt nom Puffer RW2 wäschen, déi eidel Rouer Zentrifugéierungsoperatioun mat der Zentrifugéierungsgeschwindegkeet ausféiert, déi fir Operatioun uginn ass, d'Zäit vun der eidel Rouer Zentrifugéierungsoperatioun op 2 min erhéijen wann et nach ëmmer Ethanolrest ass, oder et bei Raumtemperatur fir 5 m lass loossen.
