Erklärung vun Basis Molekulare Biologie Begrëffer
1. cDNA an cccDNA: cDNA ass eng duebelstrengeg DNA synthetiséiert duerch ëmgedréint Transkriptase vu mRNA;cccDNA ass e Plasmid duebelstrengeg zouene kreesfërmeg DNA fräi vum Chromosom.
2. Standard Folding Eenheet: d'Protein sekundär Struktur Eenheet α-Heliks a β-Blat kann strukturell Blöcke mat spezielle geometreschen Arrangementer duerch verschidde Verbindungspolypeptiden bilden.Dës Zort vu bestëmmte Klappung gëtt normalerweis super sekundär Struktur genannt.Bal all tertiär Strukture kënnen duerch dës Klapptypen beschriwwe ginn, a souguer hir kombinéiert Aarte, sou datt se och Standard Klappunitéiten genannt ginn.
3. CAP: zyklesch Adenosin Monophosphat (cAMP) Rezeptor Protein CRP (cAMP Rezeptor Protein), de Komplex geformt no der Kombinatioun vu cAMP a CRP gëtt Aktivéierungsprotein CAP (cAMP aktivéiert Protein) genannt.
4. Palindromesch Sequenz: Déi ëmgedréint komplementär Sequenz vun engem Segment vun engem DNA Fragment, dacks eng Restriktiounsenzymplaz.
5. micRNA: Ergänzlech interferéierend RNA oder antisense RNA, déi komplementär zu der mRNA Sequenz ass a kann d'Iwwersetzung vu mRNA hemmen.
6. Ribozyme: RNA mat katalytescher Aktivitéit, déi eng autokatalytesch Roll am Splicingprozess vun RNA spillt.
7. Motiv: Et ginn e puer lokal Regioune mat ähnlechen dreidimensionalen Form an Topologie an der raimlecher Struktur vun Proteinmolekülen
8. Signal Peptid: e Peptid mat 15-36 Aminosäurereschter am N-Terminus während der Proteinsynthese, déi d'Transmembran vum Protein guidéiert.
9. Attenuator: Eng Nukleotid Sequenz tëscht enger Bedreiwerregioun an engem strukturelle Gen, deen d'Transkriptioun ofschléisst.
10. Magic Spot: Wann d'Bakterien wuessen an e komplette Mangel un Aminosäuren begéinen, produzéieren d'Bakterien eng Noutreaktioun fir den Ausdrock vun all Genen ze stoppen.D'Signaler déi dës Noutreaktioun generéieren sinn Guanosin-Tetraphosphat (ppGpp) a Guanosin-Pentaphosphat (pppGpp).D'Roll vu PpGpp an pppGpp ass net nëmmen een oder e puer Operonen, mee beaflosst eng grouss Zuel vun hinnen, sou datt se Superregulatoren oder Zauberflecken genannt ginn.
11. Upstream Promoteur Element: bezitt sech op d'DNA Sequenz, déi eng reglementaresch Roll an der Aktivitéit vum Promoteur spillt, wéi TATA an der -10 Regioun, TGACA an der -35 Regioun, Enhancer an Attenuatoren.
12. DNA-Sond: e markéierte Segment vun DNA mat enger bekannter Sequenz, déi wäit benotzt gëtt fir onbekannt Sequenzen an Écran Zilgenen z'entdecken.
13. SD Sequenz: Et ass déi bindend Sequenz vu Ribosom a mRNA, déi d'Iwwersetzung reguléiert.
14. Monoklonal Antikörper: En Antikörper deen nëmmen géint een eenzegen antigene Determinant handelt.
15. Cosmid: Et ass e kënschtlech konstruéierten exogenen DNA-Vektor, deen d'COS-Regiounen op béide Enden vun der Phage behält a mam Plasmid verbonnen ass.
16. Blo-wäiss Fleck-Screening: LacZ-Gen (kodéiert β-Galaktosidase), den Enzym kann de chromogene Substrat X-gal (5-Brom-4-Chlor-3-Indol-β-D-Galaktosid) zersetzen fir blo ze produzéieren, sou datt de Stamm blo gëtt.Wann déi exogen DNA agebaut ass, kann de LacZ Gen net ausgedréckt ginn, an de Stamm ass wäiss, fir d'rekombinant Bakterien ze screenen.Dëst gëtt blo-wäiss Screening genannt.
17. Cis-handelen Element: Eng spezifesch Sequenz vun Basen an DNA datt Genausdrock reguléieren.
18. Klenow Enzym: Grousst Fragment vun DNA Polymerase I, ausser datt d'5' 3' Exonuklease Aktivitéit aus dem DNA Polymerase I Holoenzym geläscht gëtt
19. Verankert PCR: benotzt fir d'DNA vun Interesse mat enger bekannter Sequenz op engem Enn ze verstäerken.E Poly-dG Schwänz gouf op een Enn vun der onbekannter Sequenz bäigefüügt, an dann goufen de Poly-dC an déi bekannte Sequenz als Primer fir PCR Amplifikatioun benotzt.
20. Fusiounsprotein: D'Gen vum eukaryotesche Protein ass mat exogenen Gen verbonnen, an de Protein besteet aus der Iwwersetzung vum originelle Genprotein an exogene Protein gëtt zur selwechter Zäit ausgedréckt.
Aner molekulare Biologie Begrëffer
1. Déi kierperlech Kaart vun DNA ass d'Uerdnung an där d'(Restriktioun Endonuklease-verdauet) Fragmenter vun der DNA Molekül arrangéiert sinn.
2. D'Spaltung vun RNase gëtt an zwou Zorte gedeelt (Autokatalyse) an (Heerokatalyse).
3. Et ginn dräi Initiatiounsfaktoren an Prokaryoten sinn (IF-1), (IF-2) an (IF-3).
4. Transmembrane Proteinen erfuerderen Leedung (Signalpeptiden), an d'Roll vun Proteinchaperonen ass (hëlleft fir d'Peptidkette an d'native Konformatioun vum Protein ze klappen).
5. Elementer an Promoteuren kann allgemeng an zwou Zorte ënnerdeelt ginn: (Kär Promoteur Elementer) an (upstream Promoteur Elementer).
6. De Fuerschungsinhalt vun der molekulare Biologie enthält haaptsächlech dräi Deeler: (strukturell molekulare Biologie), (Genausdrock a Regulatioun), an (DNA Rekombinatiounstechnologie).
7. Déi zwee Schlësselexperimenter, déi weisen datt DNA dat genetesch Material ass (Pneumokokken Infektioun vu Mais) an (T2 Phage Infektioun vun Escherichia coli).Potenzial).
8. Et ginn zwee Haaptdifferenzen tëscht hnRNA an mRNA: (hnRNA gëtt am Prozess vun der Ëmwandlung an mRNA gespléckt), (de 5' Enn vum mRNA gëtt mat enger m7pGppp Cap bäigefüügt, an et gëtt eng extra Polyadenylatioun um 3' Enn vun der mRNA Säure (polyA) Schwanz).
9. D'Virdeeler vun der Multi-Ënnerunitéit Form vu Protein sinn (Ënnerunitéit ass eng wirtschaftlech Method fir d'DNA-Notzung), (kann den Impakt vun zoufälleg Feeler an der Proteinsynthese op d'Proteinaktivitéit reduzéieren), (Aktivitéit kann ganz effizient sinn a séier opgemaach an zougemaach ginn).
10. D'Haaptrei Inhalt vun Protein ausklappen Mechanismus éischt nucleation Theorie ëmfaasst (Nukleatioun), (strukturell Beräicherung), (endlech Ëmbau).
11. Galaktose huet eng duebel Effekt op Bakterien;engersäits (et kann als Kuelestoff Quell fir Zell Wuesstem benotzt ginn);op der anerer Säit (et ass och e Bestanddeel vun der Zellmauer).Dofir ass e cAMP-CRP-onofhängege Promoteur S2 fir d'permanente Synthese um Hannergrondniveau gebraucht;zur selwechter Zäit ass e cAMP-CRP-ofhängege Promoteur S1 gebraucht fir den héijen Niveau Synthese ze regelen.Transkriptioun fänkt vun (S2) mat G a vun (S1) ouni G.
12. Rekombinant DNA Technologie ass och bekannt als (Gene Klonen) oder (molekulare Klonen).D'ultimativ Zil ass (d'genetesch Informatioun DNA an engem Organismus an en aneren Organismus ze transferéieren).En typescht DNA Rekombinatiounsexperiment enthält normalerweis déi folgend Schrëtt: (1) Extrait den Zilgen (oder exogene Gen) vum Spenderorganismus, a verbënnt et enzymatesch mat engem aneren DNA Molekül (Klonungsvektor) fir en neit rekombinant DNA Molekül ze bilden.② D'rekombinant DNA Molekül gëtt an d'Empfängerzelle transferéiert an an der Empfängerzell replizéiert.Dëse Prozess gëtt Transformatioun genannt.③ Screen an identifizéieren déi Empfängerzellen déi d'rekombinant DNA absorbéiert hunn.④Kultivéiert d'Zellen déi rekombinant DNA a grousse Quantitéite enthalen fir z'entdecken ob den auslännesche Hëllefsgen ausgedréckt gëtt.
13. Et ginn zwou Zorte vu Plasmid-Replikatioun: déi, déi strikt duerch d'Hostzellproteinsynthese kontrolléiert ginn, ginn genannt (enk Plasmiden), an déi, déi net strikt duerch d'Hostzellproteinsynthese kontrolléiert ginn, ginn genannt (relaxéiert Plasmiden).
14. De PCR Reaktiounssystem soll déi folgend Konditiounen hunn: a.DNA Primer (ongeféier 20 Basen) mat komplementäre Sequenzen op all Enn vun den zwee Stränge vum Zilgen, déi getrennt sinn.b.Enzyme mat thermescher Stabilitéit wéi: TagDNA Polymerase.c, dNTPd, DNA Sequenz vun Interesse als Schabloun
15. De Basisreaktiounsprozess vu PCR enthält dräi Etappen: (Denaturatioun), (Annealing) an (Extensioun).
16. De Basisprozess vun transgenen Déieren enthält normalerweis: ①Aféierung vu gekloonten auslännesche Gen an de Kär vun engem befruchteten Ee oder embryonale Stammzelle;②Transplantatioun vum inokuléierten befruchtet Ee oder embryonal Stammzelle an d'weiblech Gebärmutter;③ Komplett embryonal Entwécklung a Wuesstum Fir d'Nofolger mat auslännesche Genen;④ Benotzt dës Déieren déi auslännesch Proteine produzéieren als Zuchtstéck fir nei homozygot Linnen z'entwéckelen.
17. Hybridoma Zelllinne ginn duerch Hybridiséierung (Mëlz B) Zellen mat (Myelom) Zellen generéiert, a well (Mëlzzellen) Hypoxanthin benotzen an (Knachzellen) Zell Divisiounsfunktiounen ubidden, kënne se an HAT Medium ugebaut ginn.wuessen.
18. Mat der Tiefe vun der Fuerschung gëtt déi éischt Generatioun vun Antikörper genannt (polyclonal Antikörper), déi zweet Generatioun (monoklonal Antikörper), an déi drëtt Generatioun (Gentechnik Antikörper).
19. Am Moment ass d'Gentechnik vun Insektvirus haaptsächlech op Baculovirus konzentréiert, wat an der Aféierung vun (exogene Toxin-Gen) manifestéiert ass;(Genen déi den normale Liewenszyklus vun Insekten stéieren);(Modifikatioun vu Virusgenen).
20. D'trans-handele Protein Faktoren entspriechend der gemeinsamer Elementer TATA, GC, an CAAT am Mamendéieren RNS polymerase II Promoteur sinn (TFIID), (SP-1) an (CTF /NF1), respektiv.
eenanzwanzeg.D'Basis Transkriptiounsfaktoren vun der RNA Polymerase Ⅱ sinn TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, an hir verbindlech Sequenz ass: (D, A, B, E).Wou d'Funktioun vun TFII-D ass (bindend un TATA Këscht).
zwanzeg zwee.Déi meescht vun den Transkriptiounsfaktoren, déi un DNA binden, funktionnéieren a Form vun Dimeren.Déi funktionell Beräicher vun Transkriptiounsfaktoren, déi un DNA binden, sinn allgemeng déi folgend (Helik-Turn-Helikus), (Zinkfingermotiv), (Basis-Leucine) Zippermotiv).
dräi an zwanzeg.Et ginn dräi Aarte vu Restriktiouns-Endonuklease Spaltmodi: (op der 5' Säit vun der Symmetrieachs geschnidden fir 5' Sticky Enden ze generéieren), (op der 3' Säit vun der Symmetrieachs geschnidden fir 3' Sticky Enden ze generéieren (op der Symmetrieachs geschnidden fir flaach Segmenter ze generéieren)).
véieranzwanzeg.Plasmid DNA huet dräi verschidde Konfiguratiounen: (SC Konfiguratioun), (oc Konfiguratioun), (L Konfiguratioun).Déi éischt an der Elektrophorese ass (SC Konfiguratioun).
25. Exogene Genausdrocksystemer, haaptsächlech (Escherichia coli), (Heef), (Insekt) an (Mammalian Zell Dësch).
26. Déi allgemeng benotzt Methoden fir transgen Déieren sinn: (retroviral Infektiounsmethod), (DNA Mikroinjektiounsmethod), (embryonal Stammzellmethod).
Applikatioun Molekulare Biologie
1. Numm d'Funktioune vu méi wéi 5 RNAs?
Transfer RNA tRNA Transfer Aminosaier Ribosom RNA rRNA Ribosom constitus messenger RNA mRNA Protein Synthese Schabloun Heterogen nuklear RNA hnRNA Virgänger vu reife mRNA kleng nuklear RNA snRNA Involvéiert an hnRNA Splicing Kleng RNA Splicing Kleng RNA scRNA/7SL-RNAs cytoplasmic RNA scRNA/7SL-RNA Proteinen zytolocaliséiertem Retikuléierten Kierper an RNA Synthese-Signal-Retikulum-Kierper-Signal-Plasma-Retikulum /micRNA Reguléiert Genausdrock Ribozyme RNA Enzymatesch aktiv RNA
2. Wat ass den Haaptunterschied tëscht prokaryoteschen an eukaryoteschen Promoteuren?
Prokaryotesch TTGACA --- TATAAT------Initiatiounsplaz-35 -10 Eukaryotesch Enhancer---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-Initiatiounsplaz-110 -70 -25
3. Wat sinn d'Haaptaspekter vun der kënschtlecher Konstruktioun vun natierleche Plasmiden?
Natierlech Plasmiden hunn dacks Mängel, sou datt se net gëeegent sinn fir als Träger fir Gentechnik ze benotzen, a musse geännert a gebaut ginn: a.Füügt gëeegent Selektiounsmarker Genen, sou wéi zwee oder méi, déi einfach fir Selektioun ze benotzen, normalerweis Antibiotikgenen.b.Erhéije oder reduzéieren gëeegent Enzymschneidplazen fir d'Rekombinatioun ze erliichteren.c.D'Längt verkierzen, onnéideg Fragmenter ofschneiden, d'Importeffizienz verbesseren an d'Luedekapazitéit erhéijen.d.Ännert de Replikon, vu knapper bis locker, vu manner Exemplare op méi Exemplare.e.Füügt speziell genetesch Elementer no de speziellen Ufuerderunge vun der Gentechnik
4. Gitt e Beispill vun enger Method fir differenziell Screening vun Tissue-spezifesche cDNA?
Zwou Zellpopulatiounen ginn virbereet, den Zilgen gëtt an enger vun den Zellen ausgedréckt oder héich ausgedréckt, an den Zilgen gëtt net ausgedréckt oder niddereg an der anerer Zell ausgedréckt, an dann gëtt den Zilgen duerch Hybridiséierung a Verglach fonnt.Zum Beispill, wärend der Optriede an der Entwécklung vun Tumoren, wäerten Tumorzellen mRNAs mat ënnerschiddlechen Ausdrockniveauen presentéieren wéi normal Zellen.Dofir kënnen Tumor-Zesummenhang Genen duerch differenziell Hybridiséierung gescannt ginn.D'Induktiounsmethod kann och benotzt ginn fir d'Gen ze screenen, deenen hiren Ausdrock induzéiert gëtt.
5. Generatioun an Duerchmusterung vun hybridoma Zell Linnen?
Milz B Zellen + Myelom Zellen, addéiere Polyethylenglycol (PEG) fir Zellfusioun ze förderen, an d'Mëlz B-Myelom Fusiounszellen, déi an HAT Medium gewuess sinn (enthält Hypoxanthin, Aminopterin, T) weider ernären auszebauen.D'Zellfusioun enthält: Milz-Mëlz Fusiounszellen: kann net wuessen, Milzzellen kënnen net in vitro kultivéiert ginn.Knochen-Knachfusiounszellen: kënnen net Hypoxanthin benotzen, awer kënne Purin duerch den zweete Wee mat Folatreduktase synthetiséieren.Aminopterin hemmt Folatreduktase a kann also net wuessen.Schanken-Mëlz Fusiounszellen: kënnen an HAT wuessen, Milzzellen kënnen Hypoxanthin benotzen, a Schankenzellen bidden Zell Divisiounsfunktioun.
6. Wat ass de Prinzip an d'Method fir d'Primärstruktur vun der DNA duerch d'Dideoxy-Terminéierungsmethod (Sanger Method) ze bestëmmen?
De Prinzip ass en Nukleotidketteterminator ze benotzen - 2,,3,-dideoxynukleotid fir d'Verlängerung vun der DNA ofzeschléissen.Well et feelt den 3-OH néideg fir d'Bildung vun 3/5 / Phosphodiester Obligatiounen, eemol an d'DNA Kette agebaut, kann d'DNA Kette net weider verlängert ginn.Laut dem Prinzip vun der Basispaarung, wann ëmmer DNA Polymerase dNMP brauch fir un der normaler verlängerter DNA Kette deelzehuelen, ginn et zwou Méiglechkeeten, eng ass un ddNTP deelzehuelen, wat zu der Kënnegung vun der Deoxynukleotid Kettenverlängerung resultéiert;déi aner ass fir un dNTP deelzehuelen, sou datt d'DNA-Kette nach weider ka verlängeren bis déi nächst ddNTP agebaut ass.No dëser Method kann eng Grupp vun DNA Fragmenter vu verschiddene Längt op ddNTP enden kritt ginn.D'Methode ass a véier Gruppen opzedeelen respektiv ddAMP, ddGMP, ddCMP, an ddTMP.No der Reaktioun kann d'Polyacrylamidgel Elektrophorese d'DNA-Sequenz no de Schwammbänner liesen.
7. Wat ass de positiven Reguléierungseffekt vum Aktivatorprotein (CAP) op Transkriptioun?
Cyclesch Adenylat (cAMP) Rezeptor Protein CRP (cAMP Rezeptor Protein), de Komplex geformt duerch d'Kombinatioun vu cAMP a CRP gëtt CAP (cAMPaktivéiert Protein) genannt.Wann E. coli an engem Medium ugebaut gëtt ouni Glukos, erhéicht d'Synthese vu CAP, an CAP huet d'Funktioun fir Promoteuren wéi Laktose (Lac) ze aktivéieren.E puer CRP-ofhängeg Promoteuren feelen déi typesch -35 Regioun Sequenz Feature (TTGACA) déi allgemeng Promoteuren hunn.Dofir ass et schwéier fir RNA Polymerase dermat ze binden.D'Präsenz vu CAP (Funktioun): kann d'Bindungskonstant vum Enzym a Promoteur wesentlech verbesseren.Et weist haaptsächlech déi folgend zwee Aspekter: ① CAP hëlleft dem Enzymmolekül richteg ze orientéieren andeems d'Konformatioun vum Promoteur an d'Interaktioun mam Enzym geännert gëtt, fir mat der -10 Regioun ze kombinéieren an d'Roll ze spillen fir d'Funktioun vun der -35 Regioun ze ersetzen.②CAP kann och d'Bindung vun der RNA Polymerase un aner Siten an der DNA hemmen, an doduerch d'Wahrscheinlechkeet vun der Bindung zu sengem spezifesche Promoteur erhéijen.
8. Wéi eng Schrëtt sinn normalerweis an engem typesche DNA Rekombinatiounsexperiment abegraff?
a.Extrait den Zilgen (oder exogene Gen) vum Spenderorganismus, a verbënnt et enzymatesch mat engem aneren DNA Molekül (Klonungsvektor) fir en neit rekombinant DNA Molekül ze bilden.b.Transfert de rekombinante DNA Molekül an d'Empfängerzell a replizéiert a bewahrt se an der Empfängerzell.Dëse Prozess gëtt Transformatioun genannt.c.Screen an identifizéieren déi Empfängerzellen déi d'rekombinant DNA absorbéiert hunn.d.Massekultur d'Zellen déi rekombinant DNA enthalen fir z'entdecken ob den auslännesche Hëllefsgen ausgedréckt gëtt.
9. Konstruktioun vun der Genbibliothéik Dräi Methoden fir Screening vu Rekombinanten ginn uginn an de Prozess gëtt kuerz beschriwwen.
Antibiotikresistenz-Screening, Insertion-Inaktivéierung vu Resistenz, Blo-wäiss Fleck-Screening oder PCR-Screening, Differential-Screening, DNA-Sond Déi meescht Klonungsvektoren droen Antibiotikresistenzgenen (Anti-Ampicillin, Tetracyclin).Wann de Plasmid an Escherichia coli transferéiert gëtt, kréien d'Bakterien Resistenz, an déi ouni Transfert hunn keng Resistenz.Awer et kann net ënnerscheeden ob et nei organiséiert gouf oder net.An engem Vektor deen zwee Resistenzgenen enthält, wann en auslännescht DNA Fragment an ee vun de Genen agebaut gëtt a verursaacht datt de Gen inaktivéiert gëtt, kënnen zwou Plackkontrolle mat verschiddene Medikamenter benotzt ginn fir positiv Rekombinanten ze screenen.Zum Beispill enthält de pUC-Plasmid de LacZ-Gen (kodéiert β-Galaktosidase), wat de chromogene Substrat X-gal (5-Brom-4-Chlor-3-Indol-β-D-Galaktosid) zerstéiere kann fir blo ze produzéieren, sou datt de Stamm blo gëtt.Wann déi auslännesch DNA agefouert gëtt, kann de LacZ Gen net ausgedréckt ginn, an de Stamm ass wäiss, fir d'rekombinant Bakterien ze screenen.
10. Erklären de Grondprozess fir transgen Déieren duerch embryonal Stammzellen ze kréien?
Embryonal Stammzellen (ES) sinn embryonal Zellen wärend der embryonescher Entwécklung, déi kënschtlech kultivéiert a proliferéiert kënne ginn an d'Funktioun hunn an aner Zellen z'ënnerscheeden.Kultur vun ES Zellen: Déi bannescht Zellmass vum Blastocyst gëtt isoléiert a kultivéiert.Wann ES an enger fidderenfräier Schicht kultivéiert gëtt, differenzéiert se sech a verschidde funktionell Zellen wéi Muskelzellen an N Zellen.Wann kultivéiert an engem Medium mat Fibroblasten, wäert ES d'Differenzéierungsfunktioun behalen.ES kann genetesch manipuléiert ginn, a seng Differenzéierungsfunktioun kann integréiert ginn ouni seng Differenzéierungsfunktioun ze beaflossen, wat de Problem vun der zoufälleger Integratioun léist.Exogene Genen an embryonal Stammzellen aféieren, dann an d'Gebärmutter vu schwangere weibleche Mais implantéieren, sech zu Welpen entwéckelen a kräizen fir homozygot Mais ze kréien.
