Ct Wäert ass déi wichtegst Resultat Presentatioun Form vu fluoreszent quantitative PCR.Et gëtt benotzt fir Genausdrock Differenzen oder Genkopienummer ze berechnen.Also wat ass de Ct Wäert vun der Fluoreszenzquantifikatioun als raisonnabel ugesinn?Wéi garantéiert d'effektiv Gamme vu Ct Wäert?

Wat ass Ct Wäert?
Wärend dem qPCR Amplifikatiounsprozess ass déi entspriechend Unzuel vun Amplifikatiounszyklen (Cycle Threshold) wann de Fluoreszenzsignal vum verstäerkte Produkt de festgeluegte Fluoreszenzschwell erreecht.C steet fir Cycle an T steet fir Threshold.Einfach gesot, de Ct Wäert ass d'Zuel vun den Zyklen entsprécht wann déi initial Schablounverstärkung eng gewësse Quantitéit u Produkt am qPCR erreecht.De sougenannte "e bestëmmte Betrag u Produkt" gëtt spéider weider erkläert.

Wat mécht de Ct Wäert?

1.Relatioun tëscht exponentiellem Verstäerkung, Schablounbetrag an Ct Wäert
Idealerweis gi Genen am qPCR duerch exponentiell Amplifikatioun no enger gewësser Zuel vun Zyklen accumuléiert.D'Relatioun tëscht der Unzuel vun de Verstäerkungszyklen an der Quantitéit u Produkter ass: Amplifizéiert Produktbetrag = initial Schablounbetrag × (1+En) Zyklen Zuel.Wéi och ëmmer, d'qPCR Reaktioun ass net ëmmer an enger idealer Situatioun.Wann d'Quantitéit vum verstäerkte Produkt e "bestëmmte Produktbetrag" erreecht, ass d'Zuel vun den Zyklen zu dëser Zäit de Ct Wäert, an et ass an der exponentieller Verstäerkungsperiod.D'Relatioun tëscht dem Ct-Wäert an dem Betrag vun der Startschabloun: Et gëtt eng linear Relatioun tëscht dem Ct-Wäert vun der Schabloun an dem Logarithmus vun der Startkopienummer vun der Schabloun.Wat méi héich d'initial Schabloun Konzentratioun ass, dest méi kleng ass de Ct Wäert;wat méi niddereg d'initial Schabloun Konzentratioun ass, dest méi grouss ass de Ct Wäert.

2.Amplifikatiounskurve, Fluoreszenzschwell a bestëmmte PCR Produktbetrag
D'Quantitéit vum qPCR Amplifikatiounsprodukt gëtt direkt a Form vu fluoreszent Signal presentéiert, dat ass d'Verstäerkungskurve.Am fréie Stadium vum PCR ass d'Verstäerkung ënner ideale Bedingungen, d'Zuel vun den Zyklen ass kleng, d'Produktakkumulatioun ass kleng, an den Niveau vun der Fluoreszenz kann net kloer vum Fluoreszenzhannergrond ënnerscheeden.Duerno klëmmt d'Fluoreszenz a geet an d'exponentiell Phase.D'Quantitéit vum PCR Produkt kann zu engem bestëmmte Punkt festgestallt ginn wann d'PCR Reaktioun just an der exponentieller Phase ass, déi als "e gewësse Betrag vum Produkt" benotzt ka ginn, an den initialen Inhalt vun der Schabloun kann dovun ofgeleet ginn.Dofir ass d'Fluoreszenz Signalintensitéit entspriechend enger gewësser Quantitéit vum Produkt de Fluoreszenzschwell.

An der spéider Phase vum PCR weist d'Verstäerkungskurve net méi exponentiell Verstäerkung, a gitt an d'linear Phase an d'Plateauphase.

3.Reproducibility vun Ct Wäerter
Wann de PCR Zyklus d'Zyklusnummer vum Ct Wäert erreecht, ass et just an déi richteg exponentiell Verstärkungsperiod agaangen.Zu dësem Zäitpunkt ass de klenge Feeler net verstäerkt ginn, sou datt d'Reproduzibilitéit vum Ct-Wäert excellent ass, dat heescht, déi selwecht Schabloun gëtt zu verschiddenen Zäiten oder a verschiddene Réier zur selwechter Zäit verstäerkt.Amplifikatioun, de kritt Ct Wäert ass konstant.

1.Amplification Effizienz En
PCR Amplifikatiounseffizienz bezitt sech op d'Effizienz mat där d'Polymerase d'Gen konvertéiert fir an en Amplikon amplifizéiert ze ginn.D'Verstäerkungseffizienz wann een DNA Molekül an zwee DNA Moleküle transforméiert gëtt ass 100%.Amplifikatioun Effizienz gëtt allgemeng als En ausgedréckt.Fir d'Analyse vun de spéideren Artikelen ze erliichteren, ginn d'Faktoren, déi d'Verstäerkungseffizienz beaflossen, kuerz agefouert.

2.Gamme vu Ct Wäerter
Ct Wäerter variéiere vun 15-35.Wann de Ct Wäert manner wéi 15 ass, gëtt ugeholl datt d'Verstäerkung am Beräich vun der Baseline Period ass an d'Fluoreszenzschwell net erreecht gouf.Ideal ass et eng linear Relatioun tëscht dem Ct Wäert an dem Logarithmus vun der initialer Kopienummer vun der Schabloun, dat heescht, der Standardkurve.Duerch d'Standardkurve, wann d'Verstäerkungseffizienz 100% ass, ass de berechent Ct-Wäert fir d'Singlekopienummer vum Gen ze quantifizéieren ongeféier 35. Wann et méi wéi 35 ass, ass d'initial Kopienummer vun der Schabloun theoretesch manner wéi 1, wat als sënnlos ugesi ka ginn.

Fir verschidde Gen-Ct-Beräicher, wéinst dem Ënnerscheed an der Genkopienummer an der Amplifikatiounseffizienz am initialen Schablounbetrag, ass et néideg eng Standardkurve fir de Gen ze maachen an d'linear Detektiounsberäich vum Gen ze berechnen.

3.Influencing Faktoren vun Ct Wäert
Vun der Relatioun tëscht der Zuel vun amplification Zyklen an der Quantitéit vum Produkt: Betrag vun amplifizéiert Produit = Betrag vun initial Schabloun × (1 + En) Zyklus Zuel, kann et gesi ginn, datt ënner ideal Konditiounen, de Montant vun initial Schabloun an En negativen Impakt op Ct Wäert betraff ass.Den Ënnerscheed an der Schablounqualitéit oder der Verstäerkungseffizienz verursaacht datt de Ct Wäert ze grouss oder ze kleng ass.

4.Ct Wäert ass ze grouss oder ze kleng