Wéi vill wësst Dir

Iwwer NUcleinsäure Extraktioun

Den Ufank an Enn vun gereinegt Nukleinsäure

Alles ass schwéier am Ufank, gereinegt Nukleinsäure ass am meeschten

Initiatioun vu molekulare Experimenter, fir spéider Experimenter

Erfolleg oder Echec huet en entscheedende Impakt.

Trace / Ultra-Trace UV Spektrofotometer gëtt vu ville wëssenschaftleche Fuerscher favoriséiert well et d'Nukleinsäurekonzentratioun a Protein- a Salzionreschter einfach, séier a wirtschaftlech erkennen kann.

Wéi mir all wëssen, heescht A260 Nukleinsäure Absorptioun OD Wäert, A280 heescht Protein Konzentratioun Absorptioun OD Wäert, A230 heescht Salzion Konzentratioun Absorptioun OD Wäert, also A260 kann Nukleinsäure Konzentratioun ëmwandelen, A260/280 heescht Protein Rescht, A260/230 heescht Salzion Rescht, awer dëst ass just eng Reegel baséiert op enger Reegel baséiert op eng Reegel.konventionell" ze gleewen datt et d'Rengheet vun DNA an RNA erkläre kannengem gewësse Mooss.Et ass net deen eenzege Standard fir d'Identifikatioun vun der Nukleinsäure nozeginn a Rengheet, et gëtt nëmmen als Referenz benotzt, an et ass keen "Goldstandard".

D'Thermo Fisher ND-2000 Handbuch betount d'Zouverlässegkeet vun den Testresultater

De Grond ass datt d'Resultater, déi mat engem Mikro / Ultramikro UV Spektrofotometer kritt ginn, nëmmen d'Ausbezuelung an d'Rengheet vun der Nukleinsäure vun der Säit reflektéieren, an et gi vill Aflossfaktoren (opteschen Wee, Probevolumen, Probekonzentratioun, pH Wäert, aner Ionen déi d'Absorptiounsmiessung beaflossen, etc.), de gemoossene OD Wäert ass net onbedéngt korrekt.Zur selwechter Zäit, wéinst dem Mangel u Spezifizitéit vum Absorptiounswäertbestëmmungsmaterial, eenzegstrengeg DNA, duebelstrengend DNA, RNA, dNTPs, an e puer Proteinen hunn all Absorptiounspeaks bei 260nm Wellelängt, an d'Konzentratioun bestëmmt duerch A260 eleng ass net onbedéngt déi richteg DNA oder RNA.Konzentratioun, a seng Integritéit an Degradatioun kënnen net beurteelt ginn.

Also wéi beurteelt een d'Qualitéit vun eiser gereinegter Nukleinsäure?Zousätzlech fir e Mikro / Ultramikro UV Spektrofotometer fir Detektioun ze benotzen, sinn Methoden wéi Agarosegel Elektrophorese och erfuerderlech fir d'Rengheet an d'Integritéit vun der Nukleinsäure visuell ze weisen, an d'Konzentratioun zu engem gewësse Mooss ze weisen.Op dës Manéier sinn d'Nukleinsäure-Ausbezuelung an d'Rengheet, déi aus den Detektiounsresultater vu verschiddene Methoden kritt gëtt, glafwierdeg.

Experimentell Chart Verglach

Genomesch DNA vun H1299 Zellen gouf extrahéiert mat der Firma A seng DNA Extraktiounskits, a bedeitend Gëftstofferkontaminatioun gouf gesi, wat zu héije OD Wäerter resultéiert

(OD Miesswäert an entspriechend Elektropherogramm)

Evaluatioun Index

Gëtt et e "Goldstandard" fir d'Nukleinsäureausgab a Qualitéitstest?

Sou wäit wéi mir wëssen, gëtt et keng einfach, séier a bëlleg Method.Egal ob et Spektrofotometer, Gelelektrophorese oder Massespektrometrie ass, si reflektéieren all d'Konzentratioun an d'Rengheet vun der Nukleinsäure an der Léisung aus verschiddenen Aspekter, a si musse beurteelt ginn andeems se openee referenzéieren.

De beschten Evaluatiounsindex ass ëmmerder verfollegen-up experimentell Applikatioun.Et beaflosst net d'Effizienz vun der ëmgedréiter Transkriptioun a PCR Amplifikatioun.Zouverlässeg Amplifikatiounsprodukter a Ct Wäerter ze kréien, an eng komplett Sequenz ze kréien duerch Sequenzéierung ass erfollegräich Nukleinsäure Extraktioun.

Fir ze resuméieren, soll d'Vue vun der Verhältnis-nëmmen Theorie erausgefuerdert ginn duerch d'Vue vu "benotzen gutt downstream experimentell Resultater als gutt Extraktiounsparameter"!

Recommandéiert Foregene DNA RNA Extraktiounskits fir héich DNA / RNA Rengheet ze kréien:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/