Verschidde revolutionär Erfindungen an der Geschicht vun der Detektiounstechnologie a mengem Kapp sinn Immunolabeling Technologie baséiert op dem Prinzip vun der Antigen-Antikörper spezifesch Bindung, PCR Technologie a Sequenzéierungstechnologie.Haut wäerte mir iwwer PCR Technologie schwätzen.No der Evolutioun vun der PCR Technologie deelen d'Leit gewéinlech PCR Technologie an dräi Generatiounen: gewéinlech PCR Technologie, Echtzäit fluoreszent quantitativ PCR Technologie an digital PCR Technologie.
Common PCR Technik
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
De Kary Mullis erfonnt d'Polymerase Kettenreaktioun (Polymerase Kettenreaktioun , PCR) am Joer 1983. Et gëtt gesot datt wann hien seng Frëndin gefuer ass, hien op eemol e Blëtz vun Inspiratioun hat an un de Prinzip vum PCR geduecht (iwwer d'Virdeeler vum Fuere).De Kary Mullis gouf 1993 mam Nobelpräis an der Chimie ausgezeechent. D'New York Times kommentéiert: "Héich originell a bedeitend, bal d'Biologie opgedeelt a Pre-PCR a Post-PCR Ära.
De Prinzip vum PCR: Ënnert der Katalyse vun DNA Polymerase gëtt d'Mutterstreng DNA als Schabloun benotzt, an de spezifesche Primer gëtt als Startpunkt vun der Verlängerung benotzt, an d'Duechterstreng DNA komplementär zu der Mammestreng Schabloun DNA gëtt in vitro kopéiert duerch Denaturatioun, annealing, Extensioun an aner Schrëtt.Et ass eng DNA-Synthese-Verstäerkungstechnologie in vitro, déi séier a spezifesch all Zil-DNA in vitro kann amplify.
Virdeeler vum gewéinleche PCR
1.Klassesch Method, komplett international an national Standarden
2.Niddereg Käschte vun Instrument reagents
3.PCR Produkter kënne fir aner molekulare Biologie Experimenter erholl ginn
Recommandéiert Foregene PCR Maschinn: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Verwandte Produkter: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Nodeeler vun gewéinlech PCR
1.einfach ze verschmotzen
2.ëmständlech Operatioun
3.nëmmen qualitativ Analyse
4.Mëttelméisseg Sensibilitéit
5.Et gëtt net spezifesch Verstäerkung, a wann déi net spezifesch Band déiselwecht Gréisst ass wéi d'Zilband, kann se net ënnerscheeden
CApillär Elektrophorese-baséiert PCR
Als Äntwert op d'Mängel vum gewéinleche PCR, hunn e puer Hiersteller Instrumenter agefouert op Basis vum Prinzip vun der Kapillar Elektrophorese.Den Elektrophorese-Schrëtt no der PCR-Verstärkung ass an der Kapillar ofgeschloss.D'Sensibilitéit ass méi héich, an den Ënnerscheed vu verschiddene Basen kann ënnerscheeden an d'Verstäerkung kann duerch MAERKER berechent ginn.Produit Inhalt.Den Nodeel ass datt de PCR Produkt nach ëmmer opgemaach an an d'Instrument gesat muss ginn, an et besteet nach ëmmer e grousse Risiko vu Kontaminatioun.
CApillärElectrophoresis
2. Echtzäit fluoreszent quantitative PCR (Quantitative Echtzäit PCR, qPCR) TechnologieFluorescent quantitative PCR, och Real-Time PCR genannt, ass eng nei Nukleinsäure quantitativ Technologie entwéckelt vum PE (Perkin Elmer) am Joer 1995.Wann Dir interesséiert sidd, kënnt Dir et kucken.Dës Technik ass de Moment déi meescht reift a wäit benotzt semi-quantitativ PCR Technik.
Recommandéiert qPCR Maschinn: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Fluorescent Dye Method (SYBR Green I):SYBR Green I ass deen am meeschte benotzten DNA-bindende Faarfstoff fir quantitative PCR, deen net spezifesch un duebelstrengeg DNA bindt.Am fräie Staat emittéiert SYBR Green schwaach Fluoreszenz, awer eemol gebonnen un duebelstrengend DNA, erhéicht seng Fluoreszenz 1000-fach.Dofir ass dat gesamt fluoreszent Signal, dat vun enger Reaktioun emittéiert gëtt, proportional zu der Quantitéit vun der doppelstrengegen DNA präsent a wäert eropgoen mat der Erhéijung vum amplifizéierte Produkt.Zënter datt de Faarfstoff net spezifesch un duebelstrengend DNA bindet, kënne falsch positiv Resultater generéiert ginn.
Verwandte Produkter: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Fluorescent Sonde Method (Taqman Technologie): WährendPCR Amplifikatioun, eng spezifesch fluoreszent Sonde gëtt zur selwechter Zäit wéi e Paar Primer bäigefüügt.D'Sonde ass e linear Oligonukleotid, mat enger fluoreszenter Reportergrupp an enger fluoreszenter Quenchergrupp respektiv op béide Enden markéiert.Wann d'Sonde intakt ass, gëtt de fluoreszent Signal, deen vun der Reportergrupp emittéiert gëtt, vun der Quenchergrupp absorbéiert, an d'Detektioun Et gëtt kee fluoreszent Signal;während der PCR Verstäerkung (an der Verlängerungsstadium), wäert d'5'-3' Dicer Aktivitéit vum Taq Enzym d'Sond verdauen an ofbauen, sou datt d'Reporter fluoreszent Grupp an d'Quencher fluorescent Grupp getrennt sinn, sou datt de Fluoreszenz Iwwerwachung System. d'Ulatioun vu fluoreszent Signaler an d'Bildung vu PCR Produkter.Taqman Sondemethod ass déi meescht benotzten Detektiounsmethod an der klinescher Detektioun.
Verwandte Produkter: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Virdeeler vun qPCR
1.D'Methode ass reift an d'Ënnerstëtzungsausrüstung an d'Reagenz si komplett
2.Mëttelméisseg Käschte vun reagents
3.einfach ze benotzen
4.Héich Detektiounsempfindlechkeet a Spezifizitéit
Nodeeler vun qPCR
D'Mutatioun vum Zilgen féiert zu vermësste Detektioun.
D'Detectiounsresultat vun enger niddereger Konzentratiounsschabloun kann net bestëmmt ginn.
Et gëtt e grousse Feeler wann Dir d'Standardkurve fir quantitativ Detektioun benotzt.
3. Digital PCR (digital PCR, dPCR) Technologie
Digital PCR ass eng Technik fir d'absolut Quantifikatioun vun Nukleinsäuremoleküle.Am Verglach mam qPCR kann digital PCR direkt d'Zuel vun DNA / RNA Moleküle liesen, wat d'absolut Quantifikatioun vun Nukleinsäuremolekülen an der Startprobe ass.1999 hunn de Bert Vogelstein an de Kenneth W. Kin-zler d'Konzept vun dPCR formell proposéiert.
Am Joer 2006 war Fluidigm deen éischte fir e kommerziellen Chip-baséiert dPCR Instrument ze produzéieren.Am 2009 huet Life Technologies d'OpenArray a QuantStudio 12K Flex dPCR Systemer gestart.Am 2013 huet Life Technologies de QuantStudio 3DdPCR System lancéiert, deen High-Density Nanoscale Microfluidic Chip Technologie benotzt fir Proben gläichméisseg op 20.000 eenzel Zellen ze verdeelen.an der Reaktioun gutt.
Am Joer 2011 huet Bio-Rad den Drëpsbaséierten QX100 dPCR Instrument gestart, dat Waasser-an-Ueleg Technologie benotzt fir d'Probe gläichméisseg op 20.000 Drëpsen-Waasser-an-Ueleg ze verdeelen, a benotzt en Drëpsenanalysator fir d'Drëpsen ze analyséieren.Am Joer 2012 huet RainDance de RainDrop dPCR Instrument gestart, ugedriwwen duerch Héichdrockgas, fir all Standardreaktiounssystem an eng Reaktiounsemulsioun opzedeelen, déi 1 Millioun bis 10 Millioune Picoliter-Niveau Mikrodrëpsen enthält.
Bis elo huet digital PCR zwou grouss Fraktiounen geformt, Chiptyp an Drëpstyp.Egal wéi eng Zort digital PCR, seng Kärprinzipien sinn d'Verdünnung limitéieren, Endpunkt PCR a Poisson Verdeelung.De Standard PCR Reaktioun System mat Nukleinsäure Schablounen ass gläichméisseg an Zéngdausende vu PCR Reaktiounen opgedeelt, déi op Chips oder Mikrodroppe verdeelt ginn, sou datt all Reaktioun sou vill wéi méiglech e Schablounmolekül enthält, an eng eenzeg Molekül Schabloun PCR Reaktioun gëtt gemaach.Duerch d'Liesen vun der Fluoreszenz gëtt d'Präsenz oder d'Ofwuelung vum Signal gezielt, an d'absolut Quantifikatioun gëtt no der Kalibratioun vun der statistescher Poisson Verdeelung gemaach.
Déi folgend sinn d'Charakteristike vu verschiddenen digitale PCR Plattformen déi ech benotzt hunn:
1. Bio-Rad QX200 droplet digital PCR Bio-RadQX200 ass eng ganz klassesch digital PCR Plattform, de Basis Detektiounsprozess: 20.000 Proben gi vum Drëpsgenerator generéiert Waasser-an-Ueleg Mikro-Drëpsen ginn op enger gewéinlecher PCR-Maschinn verstäerkt, a schliisslech gëtt de Fluoreszenzsignal vun all Mikro-Drëps vun engem Mikro-Drëps Lieser gelies.D'Operatioun ass méi komplizéiert, an de Risiko vu Verschmotzung ass mëttel.
Xinyi TD1 Mikro-Drëps digital PCRXinyi TD1 ass eng Hausse digital PCR Plattform, de Basis Detektiounsprozess: generéiert 30.000-50.000 Waasser-an-Ueleg Drëpsen duerch en Drëpsengenerator, verstäerkt op engem gemeinsame PCR-Instrument, a passéiert endlech.Béid Drëpsgeneratioun a Liesen op dëser Plattform ginn an engem speziellen Chip mat engem gerénge Risiko vu Kontaminatioun duerchgefouert.
STILLA Naica Mikro-Drëps Chip digital PCRSTILLA Naica ass eng relativ nei digital PCR Plattform.D'Basis Detektiounsprozess ass: Füügt d'Reaktiounsléisung un den Chip, setzt den Chip an de Mikro-Drëps Generatioun an Amplifikatioun System, a generéiert 30.000 Mikro-Drëpsen.Verbreed op den Chip, an PCR Verstäerkung ass um Chip ofgeschloss.Dann gëtt de verstäerkte Chip an de Mikro-Drëps Liesanalysesystem transferéiert, an de fluoreszent Signal gëtt gelies andeems Dir Fotoe mécht.Well de ganze Prozess an engem zouenen Chip stattfënnt, ass de Risiko vu Kontaminatioun niddereg.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D Chip digital PCR
ThermoFisher QuantStudio 3D ass eng aner klassesch Chip-baséiert digital PCR Plattform.Seng Basis Detektiounsprozess ass: Füügt d'Reaktiounsléisung an de Spreader, a verdeelt d'Reaktiounsléisung gläichméisseg op den Chip mat 20.000 Mikrowellen duerch de Spreader., den Chip op der PCR Maschinn setzen fir ze verstäerken, a schliisslech den Chip an de Lieser setzen an eng Foto maachen fir de fluoreszent Signal ze liesen.D'Operatioun ass relativ komplizéiert, an de ganze Prozess gëtt an engem zouenen Chip duerchgefouert, an de Risiko vu Kontaminatioun ass niddereg.
5. JN MEDSYS Kloerheet Chip digital PCR
JN MEDSYS Clarity ass eng relativ nei Chip-Typ digital PCR Plattform.Seng Basis Detektiounsprozess ass: Füügt d'Reaktiounsléisung an den Applikator, a verbreet d'Reaktiounsléisung gläichméisseg op 10.000 PCR-Röhre fixéiert am PCR-Röhre duerch den Applikator.Op de mikroporösen Chip geet d'Reaktiounsléisung an den Chip duerch d'Kapillaraktioun, an de PCR-Röhre mam Chip gëtt op der PCR-Maschinn fir d'Verstäerkung gesat, a schliisslech gëtt den Chip an de Lieser gesat fir de Fluoreszenz-Signal ze liesen andeems Dir eng Foto maacht.D'Operatioun ass méi komplizéiert.De Risiko vu Kontaminatioun ass niddereg.
D'Parameteren vun all digital PCR Plattform sinn wéi follegt zesummegefaasst:
D'Evaluatiounsindikatoren vun der digitaler PCR Plattform sinn: d'Zuel vun de Split-Eenheeten, d'Zuel vun de fluoreszente Kanäl, d'Komplexitéit vun der Operatioun an de Risiko vu Kontaminatioun.Awer déi wichtegst Saach ass d'Erkennungsgenauegkeet.Ee Wee fir digital PCR Plattformen ze evaluéieren ass verschidde digital PCR Plattformen ze benotzen fir sech géigesäiteg z'iwwerpréiwen, an eng aner Manéier ass Standard Substanzen mat korrekte Wäerter ze benotzen.
Virdeeler vun dPCR
1.Erreechen absolute Quantifikatioun
2.Méi héich Sensibilitéit a Spezifizitéit
3.Kann niddereg Kopie Echantillon entdecken
Nodeeler vun dPCR1. Deier Ausrüstung a Reagenz 2. Komplizéiert Operatioun a laang Detektiounszäit 3. Schmuel Detektiounsberäich
Am Moment, hunn déi dräi Generatioune vun PCR Technologie hir eege Virdeeler an Nodeeler, an all huet seng eege Applikatioun Felder, an et ass net eng Relatioun datt eng Generatioun déi aner ersetzt.De kontinuéierleche Fortschrëtt vun der Technologie huet nei Vitalitéit an d'PCR Technologie injizéiert, wat et erlaabt eng Uwendungsrichtung no der anerer ze spären, wat d'Nukleinsäuredetektioun méi praktesch a präzis mécht.
Quell: Dr Yuan hëlt Iech fir Tester
Recommandéiert Produkter:
Post Zäit: Nov-18-2022
