Viru kuerzem hunn ech eppes erstaunlech entdeckt!Vill fortgeschratt Experimenter Professionnelen ronderëm hien wëssen net emol e puer ganz Basis experimentell Wëssenspunkte.

Zum Beispill, kënnt Dir déi folgend Froen beäntweren?

Gëtt et en Ënnerscheed tëscht OD260 an A260?Wat heescht all eenzel?
OD ass d'Ofkierzung vun der optescher Dicht (optesch Dicht), A ass d'Ofkierzung vun der Absorptioun (Absorptioun), déi zwee Konzepter sinn eigentlech d'selwecht, "optesch Dicht" ass "Absorbanz", awer "optesch Dicht" ass am Aklang mat de meeschte nationale Standarden a méi standardiséiert.

Normalerweis moosse mir den OD Wäert bei 260nm fir d'Nukleinsäure Konzentratioun ze berechnen, also wat representéiert 1OD?
Nukleinsäure huet e maximalen Absorptiounspeak bei enger Wellelängt vun 260nm, déi souwuel DNA wéi och RNA enthält, souwéi fragmentéiert Nukleinsäurefragmenter (dëst ass de Schlësselpunkt).
Den OD Wäert gemooss bei enger Wellelängt vun 260 nm gouf als OD260 opgeholl.Wann d'Probe reng ass, kann den OD260-Wäert d'Konzentratioun vun der Nukleinsäureprobe berechnen.
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (duebelstrengeg DNA)
=37 μg/ml ssDNA (eenstrengeg DNA)
= 40 μg/ml RNA
=30 μg/ml dNTPs (Oligonukleotiden)
Gëtt et eng Verbindung an Ënnerscheed tëscht RT-PCR, Realtime-PCR a QPCR?
RT-PCR ass kuerz fir Reverse Transcription PCR
Real Time PCR = qPCR, kuerz fir Quantitative Real Time PCR
Obwuel Real Time PCR (Echtzäit fluoreszent quantitativ PCR) a Reverse Transcription PCR (Reverse Transcription PCR) schéngen allebéid als RT-PCR verkierzt ze ginn.Awer déi international Konventioun ass: RT-PCR bezitt sech speziell op ëmgedréint Transkriptiouns PCR.

Wat sinn déi allgemeng benotzt nt, bp, a kb fir d'Längt vun DNA / RNA an der Biologie ze beschreiwen?
nt = nukleotid
bp = Base Pair Base Pair
kb = kilobase

Natierlech géift Dir soen, datt vill Leit net ëm dës kleng Detailer këmmeren!Jiddereen mécht dat, a kee wäert Iech froen wat et ass.Dir wësst datt dëst onnéideg ass, richteg?

Nee, nee, nee, et ass ganz néideg dat ze wëssen!wéinst wat?
Well Dir wëllt en Artikel posten!Brudder!Egal ob Dir op d'Ofschloss zielt oder wëssenschaftlech Fuerschungserreechungen verfollegt, Dir musst op Artikele vertrauen fir ze schwätzen!

Nukleinsäure Extraktioun sollt dat einfachst a meescht Basis Experiment sinn.D'Qualitéit vun der Nukleinsäureextraktioun bestëmmt direkt d'Resultater vun de spéideren Experimenter.

Och wann ech et scho vill Mol gesot hunn, ginn et nach ëmmer vill Frënn déi et egal sinn.Dës Kéier hunn ech decidéiert aus dem Artikel ze plënneren!

Minimum Informatioun fir Publikatioun vu quantitativen Echtzäit PCR Experimenter, bezeechent als MIQE, ass eng Rei vu Fluoreszenz quantitativen Experimenter Richtlinnen, déi international lancéiert ginn, déi Mindestnorme proposéiere fir experimentell Informatioun néideg fir d'Evaluatioun vu Fluoreszenz quantitative PCR Experimenter an Artikelen ze publizéieren.Duerch déi experimentell Bedéngungen an Analysemethoden, déi vum Experimenter geliwwert ginn, kënnen d'Rezensoren d'Gëltegkeet vum experimentellen Schema vum Fuerscher besser evaluéieren.

Et kann gesi ginn datt an der Sektioun vun der Nukleinsäure Extraktioun déi folgend Detektiounsartikele proposéiert goufen:

"E" weist Informatioun un déi muss geliwwert ginn an "D" weist Informatioun un déi solle geliwwert ginn wann néideg.

D'Form ass ganz komplizéiert, tatsächlech wëll ech soen datt jidderee muss ufänken

Rengheet (D), Ausbezuele (D), Integritéit (E) a Konsistenz (E) fir Nukleinsäuren an dëse véier Aspekter ze evaluéieren.

Laut experimentellen Gewunnechten, schwätzen éischt iwwer d'Evaluatiounsmethoden vu Rengheet a Konzentratioun.

OD Messung ass déi Liiblings an einfachst Detektiounsmethod fir Experimenter.Wat de Prinzip ugeet, ginn ech hei net op Detailer.Vill Laboratoiren benotzen elo Ultra-Mikrospektrofotometer fir direkt quantitativ Nukleinsäure Echantillon ze analyséieren.Wärend den Absorptiounswäert ugewisen gëtt, gëtt de Programm direkt de Konzentratiounswäert (Nukleinsäure, Protein a fluoreszent Faarf) a verwandte Verhältnisser.Wat d'Analyse vum OD Wäert ugeet, späichert dëst Bild an Dir wäert gutt sinn.

Universal OD Wäert Léisung Lëscht

Wéi och ëmmer, et ginn e puer Virschléi déi separat fir Iech erausbruecht musse ginn.

(Schliisslech weess ech, Dir musst déi sinn, déi spueren a waart bis Dir se braucht!)

Note 1 Equipement

Den OD Wäert gëtt vu verschiddenen Ausrüstung beaflosst.Soulaang den OD260 an engem bestëmmte Beräich ass, sinn d'Wäerter vun OD230 an OD280 sënnvoll.Zum Beispill ass d'Absorptiounsberäich vum gemeinsame Eppendorf D30 bei 260nm 0 ~ 3A, an den NanoDrop One vun Thermo ass bei 260nm.D'Absorptiounsberäich vun 0,5 ~ 62,5A.

Note 2Verdünnungsreagens

Den OD Wäert kann duerch d'Verdünnung vu verschiddene Reagenser beaflosst ginn.Zum Beispill d'OD260/280 Liesung vu gereinegt RNA am pH7,5 10 mm TrisPuffer ass tëscht 1,9-2,1, wärend anneutral wässerlech Léisungd'Verhältnis wäert manner ginn, vläicht nëmmen 1,8-2,0, mä dat heescht net, datt d'Qualitéit vun RNA Ännerungen Ënnerscheed.

Note 3Rescht Substanzen

D'Existenz vu Reschtstoffer beaflosst d'Genauegkeet vun der Nukleinsäure Konzentratiounmiessung, sou datt et néideg ass Protein, Phenol, Polysaccharid a Polyphenolreschter an Nukleinsäure Echantillon sou vill wéi méiglech ze vermeiden.

Wéi och ëmmer, tatsächlech, Extraktioun mat organesche Reagenzen ass eng al Method.A kommerziellen Kits kann den Extraktiounseffekt duerch eng Silica-baséiert Adsorptiounskolonne mat Zentrifugéierung kombinéiert ginn, gëfteg a schiedlech organesch Reagenz ze vermeiden, déi schwéier ze läschen, etc.. De Problem, wéi z.Foregene's Nukleinsäure Extraktioun Kit, benotzt net DNase / RNase an gëfteg organesch Reagenz während der Operatioun, séier a sécher, an denEffekt assgutt(zoufälleg gesot datt et kaal war, awer ech weess datt Dir wëllt wëssen).

Beispill 1: Genomesch DNA Extraktioun Ausbezuele a Rengheet

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) behandelt Buedemproben aus verschiddene Quellen, an d'Quantitéit an d'Rengheet vun der genomescher DNA kritt ginn an der folgender Tabell gewisen:
Beispill 2: Tissue RNA Extraktioun Ausbezuelen a Rengheet

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) huet verschidde Tissueproben veraarbecht, an d'Quantitéit an d'Rengheet vun der kritt RNA ginn an der Tabell hei ënnen gewisen (fir Mausgewebe):
Denkt awer net datt Dir mam OD Wäert fäerdeg sidd.Hutt Dir keng Suergen iwwer d'Schlësselpunkten, déi ech fir Iech virdru gezeechent hunn?

Notiz

Fragmentéiert Nukleinsäuremoleküle ginn och an der Absorptioun berechent.Unzehuelen datt Dir genomesch DNA Reschter an der RNA hutt, schéngt Ären OD Wäert ganz héich ze sinn, awer déi tatsächlech Konzentratioun vu RNA kann net bestëmmt ginn.Ob Är RNA ass Et ass net kloer ob et Degradatioun ass, also brauche mir nach ëmmer eng ëmfaassend Evaluatiounsmethod fir e méi genee Uerteel ze ginn, dat ass d'Nukleinsäure Integritéit Evaluatioun ernimmt am MIQE.