Plant Total RNA Isolation Kit Plus Total RNA Purificaiton Kit fir Planzen reich an Polysacchariden a Polyphenole
Kit Beschreiwung:
Cat.No.RE-05021/05022/05024
Fir d'Reinigung vum Gesamt-RNA aus allgemenge Planzenproben déi héich Polysacchariden a Polyphenolkomponenten enthalen.
Extrait séier héichqualitativ total RNA aus Planzenproben mat héijen Inhalt vu Polysacchariden a Polyphenole.
RNase-Free Benotzt DNA-Cleaning Kolonn
Einfach - all Operatioune ginn bei Raumtemperatur ofgeschloss
Fast-Operatioun kann an 30 Minutten ofgeschloss ginn
Sécher - keen organesche Reagens benotzt 
Spezifikatioune
50 Virbereedungen, 200 Virbereedungen
De Kit benotzt d'Spin Kolonn an d'Formel entwéckelt vu Foregene, déi effizient héich Rengheet a qualitativ héichwäerteg total RNA aus verschiddene Planzegewebe mat héije Polysacchariden oder Polyphenolegehalt extrahéieren.Et bitt d'DNA-Cleaning Kolonn déi genomesch DNA einfach aus dem Supernatant an Tissuelysat ewechhuelen kann.RNA-nëmmen Kolonn kann effektiv RNA binden.De Kit kann eng grouss Zuel vu Proben zur selwechter Zäit veraarbecht.
De ganze System enthält keng RNase, sou datt de gereinegt RNA net ofgebaut gëtt.Buffer PRW1 a Buffer PRW2 kënne suergen datt d'RNA kritt net kontaminéiert ass vu Protein, DNA, Ionen an organesche Verbindungen.
Kit Komponente
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNase-Free ddH2O, DNA-Cleaning Column |
| RNA-Nëmmen Kolonn |
Fonctiounen & Virdeeler
■ Operatioun bei Raumtemperatur (15-25 ℃) duerch de ganze Prozess, ouni Äisbad an Tieftemperatur Zentrifugéierung.
■ Komplett Kit RNase-Free, keng Suergen iwwer RNA Degradatioun.
■ Besonnesch gëeegent fir d'Reinigung vu RNA aus Planzenproben vu Polysacchariden a Polyphenole.
■ DNA-Cleaning Column bindt speziell un DNA, sou datt de Kit genomesch DNA Kontaminatioun ewechhuelen kann ouni DNase ze addéieren.
■ Héich RNA Ausbezuele: RNA-nëmmen Kolonn an eenzegaarteg Formel kann RNA effizient purifizéieren.
■ Schnellgeschwindegkeet: einfach ze bedreiwen a ka bannent 30 Minutten ofgeschloss ginn.
■ Sécherheet: keen organesche Reagens ass erfuerderlech.
■ Héich Qualitéit: Déi gereinegt RNA Fragmenter si vu héijer Rengheet, fräi vu Protein an aner Gëftstoffer, a kënne verschidde downstream experimentell Uwendungen treffen.
Produit Parameteren
■ Downstream Uwendungen: Éischt-Sträng cDNA Synthese, RT-PCR, molekulare Klonen, Northern Blot, etc.
■ Echantillon: Frësch oder gefruer Planzengewebe vu Polysacchariden a Polyphenole
■ Doséierung: 50mg Planzgewebe
■ Maximal RNA bindend Kapazitéit vun der Reinigungskolonne: 80 μg
■ Elutiounsvolumen: 50-200 μl
Kit Applikatioun
Et ass gëeegent fir d'Extraktioun an d'Reinigung vun total RNA aus frëschen oder gefruerenen Planzgewebe Proben (besonnesch frësche Planzenblatgewebe) mat héije Polysacchariden a Polyphenolgehalt.
Aarbecht Flux
Diagramm
Plant Total RNA Isolation Kit Plus veraarbecht 50mg frësche Blieder vu Polysacchariden a Polyphenole, a 5% gereinegt RNA gouf duerch Elektrophorese getest.
1: Bananen
2 :gink
3: Koteng
4: Granatapfel
Stockage an Regal Liewen
Dëse Kit kann fir 24 Méint ënner dréchen Konditiounen bei Raumtemperatur (15-25 ℃) gespäichert ginn;wann et méi laang muss gespäichert ginn, kann et an 2-8 ℃ gespäichert ginn.
Buffer PSL1 ka bei 4 ℃ fir 1 Mount plazéiert ginn nodeems β-Mercaptoethanol bäigefüügt gëtt (et ass recommandéiert et zur selwechter Zäit vum Experiment ze addéieren).
D'Kolonn verstoppt
Nodeems d'Kolonn verstoppt ass, gëtt d'RNA Ausbezuele reduzéiert oder souguer onméiglech fir d'RNA ze purifizéieren, an déi kritt RNA Mass ass niddereg.
Gemeinsam Ursaach Analyse:
1. Prouf Pausen sinn net grëndlech.
Prouf Break verursaacht net ganz DNA-BOSCHT KOLONN blockéiert, wärend d'RNA Ausbezuelung an d'Qualitéit beaflosst.Mir recommandéieren eng séier Schleifoperatioun an engem genuch flëssege Stickstoff wann Dir d'Proben gebrach hutt, Probéiert d'Probe Zellmauer, Zellmembran an aner Tissu ze zerbriechen.Fir Planzenproben vu Polyolpolysacchariden empfeelen mir Iech Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS ze benotzen.
2. Wann de getrennten Proufsupernatant mat DNA-Cleaning Column saugt, kann de méigleche Zellfragmentéierte Nidderschlag inhaléiert ginn.
D'Zell fragmentéiert Sedimenter geholl verursaachen d'RNA-NËMMEN Kolonn déi blockéiert gëtt wann d'RNA Adsorptiounsoperatioun duerchgefouert gëtt (kuckt de Schrëtt 6).Mir recommandéieren Iech virsiichteg wann Dir dësen Supernatant saugt fir ze vermeiden datt d'Zellschutt gesaugt gëtt.
3. Prouf initial Betrag ass zevill.
Exzessiv Probeverbrauch wäert zu onvollstänneger Probefragmentéierung oder onvollstänneg Zelllysis vum Buffer PSL1 féieren, wat zu enger Blockéierung vun der Reinigungskolonne wärend der Reinigung resultéiert.Plant Total RNA Isolation Kit All eenzel gereinegt Operatiounsprobe ass 50 mg.Fir Planzenproben vu Polyolpolysacchariden, empfeelen mir Iech Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS ze probéieren.
4. D'Temperatur vun der Zentrifuge ass ze niddreg.
De ganze RNA Isolatioun a Reinigungsprozess gëtt bei Raumtemperatur (20-25°C), ausser datt d'Probe Tissue vu flëssege Stickstoff gebrach ass.℃, wat Blockéierung vun der DNA-Cleaning Column an/oder RNA-Only Column verursaache kann.Wann dat passéiert, setze d'Zentrifugetemperatur op 20-25℃,an anvergewëssert Iech datt d'Lysismëschung an / oder den Ethanol-addéierten Supernatant op 37 virgehëtzt gouf°C.
Keen RNA extrahéiert oder RNA Ausbezuele ass niddereg
Et gi meeschtens vill Faktoren, déi d'Erhuelungseffizienz beaflossen, sou wéi: Probe RNA Inhalt, Operatiounsmethod, d'Elutiounsvolumen, etc.
Analyse vun allgemeng Ursaachen wéi hei ënnendrënner:
1.En Äisbad oder Tieftemperatur (4 ° C) Zentrifugéierung gouf während der Operatioun gemaach.
Virschlag: Bedreiwen bei Raumtemperatur (15-25°C) am ganze Prozess, maachen net Äisbad an niddreg Temperatur centrifugation.
2.D'RNA gouf ofgebaut wéinst enger falscher Erhaalung vun der Probe oder laangfristeg Erhaalung vun der Probe.
Recommandatioun: Frësch gesammelt Proben solle séier a flëssege Stickstoff gefruer ginn, an dann bei -80 ° C fir eng laang Zäit gespäichert ginn, vermeit widderholl Afréiere an Ofdehnung vu Proben;oder direkt d'Proben an RNA Stabilisator RNAlater Léisung (Déier Echantillon).
3.Insufficient Probe Fragmentatioun a Lysis féieren zu Blockéierung vun der Reinigungskolonne.
Virschlag: Wann Dir den Tissu schleift, gitt sécher datt de Tissu genuch gemuel ass, a séier an de virbereete Buffer PSL1 transferéiert (bestätegen datt de korrekten Undeel vu β-ME derbäigesat gouf, kuckt Schrëtt 1 vun der Prozedur).
4.Den Eluent gouf falsch bäigefüügt.
Virschlag: Vergewëssert Iech datt RNase-Free ddH2O an d'Mëtt vun der Reinigungskolonnemembran getrëppelt gëtt.
5.De korrekte Volumen vum absolute Ethanol gouf net op Buffer PSL2 oder Buffer PRW2 bäigefüügt.
Suggestioun: Follegt w.e.g. d'Instruktioune, fügen d'korrekt Volumen vun absoluten Ethanol un de Buffer PSL2 a Buffer PRW2 a gutt mëschen ier de Kit benotzt gëtt.
6.D'Quantitéit vum Tissueprobe ass onpassend.
Virschlag: Benotzt 50 mg Tissu pro 500 μl Buffer PSL1.D'Benotzung vun zevill Tissue reduzéiert d'Quantitéit un extrahéiert RNA an d'Rengheet vun der resultéierender RNA gëtt och reduzéiert.Mir recommandéieren staark datt d'initial Proufdosis net méi wéi 50 mg pro RNA Extraktiounsoperatioun däerfte.
7.Inappropriate elution Volume oder onkomplett elution.
Virschlag: D'Eluentvolumen vun der Reinigungskolonne ass 50-200 μl;Wann d'Elutiounseffekt net zefriddestellend ass, ass et recommandéiert d'Zäit bei Raumtemperatur ze verlängeren nodeems Dir virgehëtzt RNase-Free ddH2O bäigefüügt, wéi 5-10min.
8.The Purification Kolonn huet Ethanol Reschter no wäschen mat BufferPRW2.
Virschlag: Wann déi eidel Röhre fir 1 min centrifugéiert gëtt an et nach ëmmer Ethanol bleift no der Wäschung am Buffer PRW2, kënnt Dir d'Zäit vun der eidel Rouer-Zentrifugatioun op 2 min erhéijen, oder d'Reinigungskolonne bei Raumtemperatur fir 5 min setzen fir de Rescht Ethanol komplett ze läschen.
9.De Kit gouf falsch benotzt.
Virschlag: Fir Planzenproben vu polyphenolesche Polysacchariden, mat gemeinsame Kits wéi Plant Total RNA Isolation Kit, kënne vläicht net ideal RNA Proben kréien.Mir recommandéieren Iech Plant Total RNA IsolationKit Plus ze benotzen, dee speziell fir polyphenolesch Polysaccharid Planzenproben entworf ass.E Kit speziell entwéckelt fir RNA aus Polyphenol- a Polysaccharid-Planzeproben ze extrahieren.
OD260/OD280 Wäert ass niddereg
RNA Elutioun mat ddH2O a benotzt fir Spektrofotometer Liesungen Resultater zu nidderegen OD260 / OD280 Wäerter.Mir recommandéieren 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 ze benotzen (anstatt RNase-Free ddH2O fir RNA ze elueren) fir relativ korrekt OD260 / OD280 Wäerter ze kréien, kuckt "RNA Konzentratioun a Purification Assays" op Säit 19.
De gereinegt RNA gëtt ofgebaut
D'Qualitéit vu gereinegt RNA ass verbonne mat Faktoren wéi Probekonservatioun, RNase Kontaminatioun a Manipulatioun.
Analyse vun allgemeng Ursaachen:
1.Tissue Echantillon goufen net an der Zäit no Sammlung gespäichert.
Empfehlung: Wann d'Tissue Echantillon net an der Zäit no der Sammlung benotzt ginn, späichere se w.e.g. a flëssege Stickstoff bei niddreger Temperatur direkt oder transferéiert se op -80 ° C fir laangfristeg Lagerung no séierem Afréiere a flëssege Stickstoff, oder daucht d'Proben direkt an RNA Stabilisator RNAlater Léisung (Déierproben).Fir RNA Extraktioun, probéiert frësch gesammelt Tissueproben ze benotzen.
2.Wiederhuelend Afréiere a Verdauung vun Tissueproben.
Virschlag: Wann Dir Tissueproben späichert, ass et am beschten se a kleng Stécker ze schneiden fir d'Konservatioun, an en Deel vun hinnen erauszehuelen wann Dir se benotzt fir d'Degradatioun vun der RNA ze vermeiden verursaacht duerch widderholl Gefrierung an Ofdehnung vun de Proben.
3.RNase gëtt am Operatiounsraum agefouert oder net gedroe Wegwerfhandschuesch, Masken, etc.
Virschlag: RNA Extraktiounsexperimenter ginn am beschten a getrennten RNA Operatiounen ausgeführt, an de Laboratoire sollt virum Experiment gebotzt ginn, an ewechzegeheien Handschuesch a Maske sollten während dem Experiment gedroe ginn fir RNA-Degradatioun ze vermeiden verursaacht duerch d'Aféierung vun RNase am gréissten Ausmooss.
4.De Reagens ass kontaminéiert vu RNase während der Benotzung.
Virschlag: Ersetzen mat enger neier Serie vu Planzen total RNA Extraktiounskits fir verwandte Experimenter.
5.D'Zentrifugerröhren a Pipette Tipps, déi fir RNA Manipulatioun benotzt ginn, si kontaminéiert mat RNase.
Virschlag: Vergewëssert Iech datt d'Zentrifugerröhren, Pipette Tipps, Pipetten, etc., déi an der RNA Extraktioun benotzt ginn, all RNase-Free sinn.
Bedienungsanleitung:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus Instruction Manual
