Planz Total RNA Isolatioun Kit Total RNA Purificaiton Kit fir Planzen niddereg an Polysacchariden a Polyphenole
Spezifikatioune
50 Virbereedungen, 200 Virbereedungen
De Kit benotzt d'Spin Kolonn an d'Formel entwéckelt vu Foregene, déi effizient héich Rengheet a qualitativ héichwäerteg total RNA aus verschiddene Planzgewebe mat nidderegen Polysacchariden a Polyphenolegehalt extrahéieren.Fir Planzenproben mat héije Polysacchariden oder Polyphenolen Inhalt, ass et recommandéiert Plant Total RNA Isolation Plus Kit ze benotzen fir besser RNA Extraktiounsresultater ze kréien.De Kit liwwert d'DNA-Cleaning Kolonn déi genomesch DNA aus dem Supernatant an Tissuelysat einfach ewechhuelen kann.RNA-nëmmen Kolonn kann effektiv RNA binden.De Kit kann eng grouss Zuel vu Proben zur selwechter Zäit veraarbecht.
De ganze System enthält keng RNase, sou datt de gereinegt RNA net ofgebaut gëtt.Buffer PRW1 a Buffer PRW2 kënne suergen datt d'RNA kritt net kontaminéiert ass vu Protein, DNA, Ionen an organesche Verbindungen.
Kit Komponente
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNase-Free ddH2O, DNA-Cleaning Column |
| RNA-Nëmmen Kolonn |
| Uweisungen |
Fonctiounen & Virdeeler
■ Operatioun bei Raumtemperatur (15-25 ℃) duerch de ganze Prozess, ouni Äisbad an Tieftemperatur Zentrifugéierung.
■ Komplett Kit RNase-Free, keng Suergen iwwer RNA Degradatioun.
■ DNA-Cleaning Column bindt speziell un DNA, sou datt de Kit genomesch DNA Kontaminatioun ewechhuelen kann ouni DNase ze addéieren.
■ Héich RNA Ausbezuele: RNA-nëmmen Kolonn an eenzegaarteg Formel kann RNA effizient purifizéieren.
■ Schnellgeschwindegkeet: einfach ze bedreiwen a ka bannent 30 Minutten ofgeschloss ginn.
■ Sécherheet: keen organesche Reagens ass erfuerderlech.
■ Héich Qualitéit: Déi gereinegt RNA Fragmenter si vu héijer Rengheet, fräi vu Protein an aner Gëftstoffer, a kënne verschidde downstream experimentell Uwendungen treffen.
Kit Applikatioun
Et ass gëeegent fir d'Extraktioun an d'Reinigung vun total RNA aus frëschen oder gefruerenen Planzgewebe Echantillon (besonnesch frësch Planz Blat Tissu) mat nidderegen Polysaccharid a Polyphenol Inhalt.
Aarbecht Flux
Diagramm
Plant Total RNA Isolation Kit Plus veraarbecht 50mg frësche Blieder vu Polysacchariden a Polyphenole, a 5% gereinegt RNA gouf duerch Elektrophorese getest.
1: Bananen
2 :gink
3: Koteng
4: Granatapfel
Stockage an Regal Liewen
De Kit kann fir 12 Méint bei Raumtemperatur (15-25 ℃) an dréchen Ëmfeld gelagert ginn, an 2-8 ℃ fir méi Zäit (24 Méint).
Buffer PSL1 ka bei 4 ℃ fir 1 Mount gespäichert ginn nodeems Dir 2-Hydroxy-1-Ethanethiol (optional) bäigefüügt huet.
Problem Analyse Guide
Déi folgend Analyse vun de Probleemer déi Dir kënnt stoussePlant GanzenRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
D'Spinnkolonn ass verstoppt
Blockéierung vun der Spin-Kolonn wäert verursaachen datt d'RNA-Ausbezuelung reduzéiert gëtt oder souguer net fäeg ass ze purifizéieren fir RNA ze kréien, an d'Qualitéit vun der kritt RNA wäert niddereg sinn.
Gemeinsam Ursaach Analyse:
1. D'Probe gëtt net komplett gebrach.
Onkomplett Probefragmentéierung kann d'DNA-Cleaning Column blockéieren, wat och d'RNA Ausbezuele a Qualitéit beaflosse kann.Mir recommandéieren datt wann Dir Prouffragmentéierung ausféiert, séier a genuch Quantitéite vu flëssege Stickstoff schleifen fir d'Tissue wéi Zellmaueren an Zellmembranen vun de Proben sou vill wéi méiglech opzebriechen.Fir Planzenproben vu Polyphenol Polysacchariden, empfeelen mir Iech Plant Total RNA Isolation Kit Plus ze benotzen.
2.Aspiréiert d'DNA-Cleaning Column isoléiert Supernatant, aspiréiert déi méiglech Zellschuttpellet.
Aspiréiert Zell Debris Pellet kann d'RNA-nëmme Kolonn während RNA Adsorptiounsprozeduren verstoppen (kuckt Schrëtt 5 vun der Prozedur, Schrëtt 6 vun der Polysaccharid Polyphenol Prozedur).Mir recommandéieren datt et oppassen muss wann Dir dësen Supernatant aspiréiert fir datt d'Zellstécker aspiréiert ginn.
3. Den initialen Betrag vun der Probe ass ze grouss.
Exzessiv Probeverbrauch wäert zu enger onvollstänneger Probefragmentéierung oder onvollstänneg Lysis vun Zellen duerch Buffer PRL1 oder Buffer PSL1 resultéieren, wat zu enger verstoppter Reinigungskolonne fir Reinigungsoperatioune resultéiert.Plant Total RNA Isolation Kit huet en initialen Maximum vu 50 mg pro eenzeg Puréierung vun enger operéierter Probe.Fir Planzenproben vu Polyphenol Polysacchariden, empfeelen mir Iech de Plant Total RNA Isolation Kit Plus ze probéieren.
4. D'Temperatur vun der Zentrifuge ass ze niddreg.
Ganz RNA Isolatioun a Reinigung ausser fir flëssege Stickstoff Stéierungen vum Probegewebe, ginn all Schrëtt bei Raumtemperatur (20-25 ° C) duerchgefouert.E puer Tieftemperatur-Zentrifugen hunn Temperaturen ënner 20 ° C, wat Blockaden an der DNA-Cleaning Column an/oder RNA-nëmmen Kolonn verursaache kann.Wann dëst geschitt, setze d'Zentrifugetemperatur op 20-25 ° C a pre-waarm d'Lysismëschung an / oder d'Zousatz vun Ethanol Trennungssupernatant op 37 ° C.
Keen RNA extrahéiert oder RNA Ausbezuele ass niddereg
Et gi meeschtens vill Faktoren, déi d'Erhuelungseffizienz beaflossen, sou wéi: Probe RNA Inhalt, Operatiounsmethod, d'Elutiounsvolumen, etc.
Analyse vun allgemeng Ursaachen wéi hei ënnendrënner:
1.En Äisbad oder Tieftemperatur (4 ° C) Zentrifugéierung gouf während der Operatioun gemaach.
Virschlag: Bedreiwen bei Raumtemperatur (15-25 ° C) am ganze Prozess, maachen net Äis Bad an niddreg Temperatur Zentrifusioun.
2.D'RNA gouf ofgebaut wéinst enger falscher Erhaalung vun der Probe oder laangfristeg Erhaalung vun der Probe.
Recommandatioun: Frësch gesammelt Proben solle séier a flëssege Stickstoff gefruer ginn, an dann bei -80 ° C fir eng laang Zäit gespäichert ginn, vermeit widderholl Afréiere an Ofdehnung vu Proben;oder direkt d'Proben an RNA Stabilisator RNAlater Léisung (Déier Echantillon).
3.Net genuch Probefragmentéierung a Lysis féieren zu Blockéierung vun der Reinigungskolonn.
Virschlag: Wann Dir den Tissu schleift, gitt sécher datt de Tissu genuch gemuel ass, a séier an de virbereete Buffer PSL1 transferéiert (bestätegen datt de korrekten Undeel vu β-ME derbäigesat gouf, kuckt Schrëtt 1 vun der Prozedur).
4.Den Eluent gouf falsch bäigefüügt.
Virschlag: Vergewëssert Iech datt RNase-Free ddH2O gëtt an d'Mëtt vun der Reinigungskolonnemembran getrëppt.
5.De korrekte Volumen vum absolute Ethanol gouf net op Buffer PSL2 oder Buffer PRW2 bäigefüügt.
Suggestioun: Follegt w.e.g. d'Instruktioune, fügen d'korrekt Volumen vun absoluten Ethanol un de Buffer PSL2 a Buffer PRW2 a gutt mëschen ier de Kit benotzt gëtt.
6.D'Quantitéit vum Tissueprobe ass onpassend.
Virschlag: Benotzt 50 mg Tissu pro 500 μl Buffer PSL1.D'Benotzung vun zevill Tissue reduzéiert d'Quantitéit un extrahéiert RNA an d'Rengheet vun der resultéierender RNA gëtt och reduzéiert.Mir recommandéieren staark datt d'initial Proufdosis net méi wéi 50 mg pro RNA Extraktiounsoperatioun däerfte.
7. Onpassend Elutiounsvolumen oder onvollstänneg Eluéierung.
Virschlag: D'Eluentvolumen vun der Reinigungskolonne ass 50-200 μl;Wann d'Elutiounseffekt net zefriddestellend ass, ass et recommandéiert d'Zäit bei Raumtemperatur ze verlängeren nodeems de virgehëtzten RNase-Free ddH bäigefüügt ass.2O, wéi 5-10min.
8.The Purification Kolonn huet Ethanol Reschter no wäschen mat Buffer PRW2.
Virschlag: Wann déi eidel Röhre fir 1 min centrifugéiert gëtt an et nach ëmmer Ethanol bleift no der Wäschung am Buffer PRW2, kënnt Dir d'Zäit vun der eidel Rouer-Zentrifugatioun op 2 min erhéijen, oder d'Reinigungskolonne bei Raumtemperatur fir 5 min setzen fir de Rescht Ethanol komplett ze läschen.
9.De Kit gouf falsch benotzt.
Virschlag: Fir Planzenproben vu polyphenolesche Polysacchariden, mat gemeinsame Kits wéi Plant Total RNA Isolation Kit, kënne vläicht net ideal RNA Proben kréien.Mir recommandéieren Iech Plant Total RNA IsolationKit Plus ze benotzen, dee speziell fir polyphenolesch Polysaccharid Planzenproben entworf ass.E Kit speziell entwéckelt fir RNA aus Polyphenol- a Polysaccharid-Planzeproben ze extrahieren.
OD260/OD280 Wäert ass niddereg
RNA Elutioun mat ddH2O a benotzt fir Spektrofotometer Liesungen Resultater zu nidderegen OD260 / OD280 Wäerter.Mir recommandéieren 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 ze benotzen (anstatt RNase-Free ddH2O fir RNA ze elueren) fir relativ korrekt OD260 / OD280 Wäerter ze kréien, kuckt "RNA Konzentratioun a Purification Assays" op Säit 19.
De gereinegt RNA gëtt ofgebaut
D'Qualitéit vu gereinegt RNA ass verbonne mat Faktoren wéi Probekonservatioun, RNase Kontaminatioun a Manipulatioun.
Analyse vun allgemeng Ursaachen:
1.Tissue Echantillon goufen net an der Zäit no Sammlung gespäichert.
Empfehlung: Wann d'Tissue Echantillon net an der Zäit no der Sammlung benotzt ginn, späichere se w.e.g. a flëssege Stickstoff bei niddreger Temperatur direkt oder transferéiert se op -80 ° C fir laangfristeg Lagerung no séierem Afréiere a flëssege Stickstoff, oder daucht d'Proben direkt an RNA Stabilisator RNAlater Léisung (Déierproben).Fir RNA Extraktioun, probéiert frësch gesammelt Tissueproben ze benotzen.
2.Wiederhuelend Afréiere a Verdauung vun Tissueproben.
Virschlag: Wann Dir Tissueproben späichert, ass et am beschten se a kleng Stécker ze schneiden fir d'Konservatioun, an en Deel vun hinnen erauszehuelen wann Dir se benotzt fir d'Degradatioun vun der RNA ze vermeiden verursaacht duerch widderholl Gefrierung an Ofdehnung vun de Proben.
3.RNase gëtt am Operatiounsraum agefouert oder net gedroe Wegwerfhandschuesch, Masken, etc.
Virschlag: RNA Extraktiounsexperimenter ginn am beschten a getrennten RNA Operatiounen ausgeführt, an de Laboratoire sollt virum Experiment gebotzt ginn, an ewechzegeheien Handschuesch a Maske sollten während dem Experiment gedroe ginn fir RNA-Degradatioun ze vermeiden verursaacht duerch d'Aféierung vun RNase am gréissten Ausmooss.
4.De Reagens ass kontaminéiert vu RNase während der Benotzung.
Virschlag: Ersetzen mat enger neier Serie vu Planzen total RNA Extraktiounskits fir verwandte Experimenter.
5.D'Zentrifugerröhren a Pipette Tipps, déi fir RNA Manipulatioun benotzt ginn, si kontaminéiert mat RNase.
Virschlag: Vergewëssert Iech datt d'Zentrifugerröhren, Pipette Tipps, Pipetten, etc., déi an der RNA Extraktioun benotzt ginn, all RNase-Free sinn.
Bedienungsanleitung:
