Keng Verstäerkungssignaler

1.D'Taq DNA Polymerase am Kit verléiert seng Aktivitéit wéinst falscher Lagerung oder Verfall vum Kit.
Empfehlung: Bestätegt d'Späicherkonditioune vum Kit;nei fügen eng entspriechend Quantitéit vun Taq DNA Polymerase un de PCR System oder kaaft en neien Real Time PCR Kit fir ähnlech Experimenter.

2.Et gi vill Inhibitoren vun Taq DNA Polymerase an der DNA Schabloun.
Virschlag: Repurify der Schabloun oder reduzéieren d'Quantitéit vun Schabloun benotzt.

3.D'Mg2+ Konzentratioun ass net gëeegent.
Empfehlung: D'Mg2+ Konzentratioun vun der 2 × Real PCR Mix déi mir ubidden ass 3.5mM.Wéi och ëmmer, fir e puer speziell Primer a Schabloune kann d'Mg2+ Konzentratioun méi héich sinn.Dofir kënnt Dir direkt MgCl2 derbäi fir d'Mg2+ Konzentratioun ze optimiséieren.Et ass recommandéiert de Mg2+ 0.5mM all Kéier fir Optimisatioun ze erhéijen.

4.D'PCR Amplifikatiounsbedéngungen sinn net gëeegent, an d'Primer Sequenz oder Konzentratioun ass falsch.
Virschlag: confirméiert d'Korrektheet vun der Primer Sequenz an de Primer ass net ofgebaut ginn;Wann d'Verstäerkungssignal net gutt ass, probéiert d'Annealtemperatur ze senken an d'Primerkonzentratioun entspriechend unzepassen.

5.De Betrag vun der Schabloun ass ze wéineg oder ze vill.
Recommandatioun: Maacht Schabloun Lineariséierungsgradientverdünnung a wielt d'Schablounkonzentratioun mat dem beschten PCR Effekt fir Echtzäit PCR Experiment.

NTC huet ze héich fluorescence Wäert

1.Reagent Kontaminatioun während Operatioun verursaacht.
Recommandatioun: Ersetzen mat neie Reagenz fir Echtzäit PCR Experimenter.

2.Kontaminatioun ass während der Virbereedung vum PCR Reaktiounssystem geschitt.
Recommandatioun: Huelt déi néideg Schutzmoossnamen während der Operatioun, wéi: Latex Handschuesch droen, Pipettespëtz mat Filter benotzen, asw.

3.D'Primer ginn ofgebaut, an d'Degradatioun vun de Primer wäert net spezifesch Amplifikatioun verursaachen.
Virschlag: Benotzt SDS-PAGE Elektrophorese fir z'entdecken ob d'Primeren ofgebaut ginn, an ersetzen se mat neie Primer fir Echtzäit PCR Experimenter.

Primer Dimer oder net spezifesch Amplifikatioun

1.D'Mg2+ Konzentratioun ass net gëeegent.
Empfehlung: D'Mg2+ Konzentratioun vun der 2 × Real PCR EasyTM Mix déi mir ubidden ass 3,5 mM.Wéi och ëmmer, fir e puer speziell Primer a Schabloune kann d'Mg2+ Konzentratioun méi héich sinn.Dofir kënnt Dir direkt MgCl2 derbäi fir d'Mg2+ Konzentratioun ze optimiséieren.Et ass recommandéiert de Mg2+ 0.5mM all Kéier fir Optimisatioun ze erhéijen.

2.D'PCR annealing Temperatur ass ze niddreg.
Virschlag: Erhéije d'PCR-Glühungstemperatur all Kéier ëm 1 ℃ oder 2 ℃.

3.De PCR Produkt ass ze laang.
Recommandatioun: D'Längt vum Echtzäit PCR Produkt soll tëscht 100-150bp sinn, net méi wéi 500bp.

4.D'Primer ginn ofgebaut, an d'Degradatioun vun de Primer féiert zu der Erscheinung vu spezifescher Amplifikatioun.
Virschlag: Benotzt SDS-PAGE Elektrophorese fir z'entdecken ob d'Primeren ofgebaut ginn, an ersetzen se mat neie Primer fir Echtzäit PCR Experimenter.

5.De PCR System ass falsch, oder de System ass ze kleng.
Virschlag: De PCR Reaktiounssystem ass ze kleng wäert d'Detektiounsgenauegkeet erofgoen.Et ass am beschten de Reaktiounssystem recommandéiert vum quantitative PCR Instrument ze benotzen fir den Echtzäit PCR Experiment nei auszeféieren.

Schlecht Wiederholbarkeet vu quantitative Wäerter

1.D'Instrument ass falsch.
Virschlag: Et kënne Feeler tëscht all PCR Lach vum Instrument sinn, wat zu enger schlechter Reproduzibilitéit wärend der Temperaturmanagement oder Detektioun resultéiert.Kuckt w.e.g. no den Instruktioune vum entspriechende Instrument.

2.D'Probe Rengheet ass net gutt.
Empfehlung: Onrein Proben féieren zu enger schlechter Reproduzibilitéit vum Experiment, wat d'Rengheet vun der Schabloun a Primer enthält.Et ass am beschten d'Schabloun nei ze purifizéieren, an d'Primer ginn am beschten duerch SDS-PAGE gereinegt.

3.D'PCR System Virbereedung a Späicherzäit ass ze laang.
Virschlag: Benotzt den Echtzäit PCR System fir PCR Experiment direkt no der Virbereedung, a loosst et net ze laang op der Säit.

4.D'PCR Amplifikatiounsbedéngungen sinn net gëeegent, an d'Primer Sequenz oder Konzentratioun ass falsch.
Virschlag: confirméiert d'Korrektheet vun der Primer Sequenz an de Primer ass net ofgebaut ginn;Wann d'Verstäerkungssignal net gutt ass, probéiert d'Annealtemperatur ze senken an d'Primerkonzentratioun entspriechend unzepassen.

5.De PCR System ass falsch, oder de System ass ze kleng.
Virschlag: De PCR Reaktiounssystem ass ze kleng wäert d'Detektiounsgenauegkeet erofgoen.Et ass am beschten de Reaktiounssystem recommandéiert vum quantitative PCR Instrument ze benotzen fir den Echtzäit PCR Experiment nei auszeféieren.