Auteuren: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Eenheet: Jiaozhou Spidol, Dongfang Spidol verbonne mat der Tongji Universitéit

Am Moment ass den Haaptprobetyp fir Atmungspathogen-Nukleinsäure-Detektioun Halswab.Et gi vill Aarte vu allgemeng benotzte Probekonservéierungsléisungen, déi all musse gekillt oder gefruer ginn fir Transport a Lagerung;Et ass schwéier de ganze Prozess vun der niddereger Temperatur während der Sammlung an dem Transportprozess ze kontrolléieren, an et ass schwéier d'Qualitéitskontrolle virum Prouftest ze garantéieren^[1-2].

RNase (RNase) ass eng Endonuklease déi RNA hydrolyséiert, haaptsächlech Phosphodiesterbindungen tëscht Nukleotiden trennt.D'RNase Molekül ass ganz stabil, et gi Disulfidbindungen an der Struktur, a seng Aktivitéit erfuerdert net d'Präsenz vun divalente Kationen, sou datt RNase net einfach denaturéiert ass, an et ass einfach ze renaturéieren och no héijer Temperatur oder der Notzung vun Denaturanten.RNases ginn an endogen an exogen opgedeelt.Déi endogen RNase kënnen zur selwechter Zäit fräigelooss ginn wann d'Zellen zerbrach sinn.Dofir ass d'Eliminatioun vun der Roll vun endogene RNases e ganz kritesche Schrëtt am RNA Extraktiounsprozess.Exogen RNase si wäit verdeelt.RNases existéieren an der Loft, mënschlech Haut, Hoer a Spaut, déi wichteg Grënn fir déi einfach Degradatioun vun RNA sinn^[3].

Daten Ufro

CANS-CL02-A009 "Uwendung vun Medical Laboratory Quality and Competency Accreditation Guidelines in the Field of Molecular Diagnosis" an den techneschen Ufuerderunge proposéiert datt entspriechend Waasserqualitéitsnormen no der Applikatioun formuléiert ginn;Wegwerf Loftdicht Behälter:

RNase / Klassifikatioun

(1) RNase A

Ribonuklease A (RNase A), ofgeleet vu Rëndfleesch Bauchspaicheldrüs, ass eng Endoribonuklease déi spezifesch den 3′ Enn vu Pyrimidinreschter op RNA attackéiere kann, Zytosin oder Uracil schneiden, geformt vun ugrenzend Nukleotiden.Phosphodiester Bond, d'Endprodukt vun der Reaktioun ass en 3' Pyrimidin Nukleotid an en Oligonukleotid mat engem 3' Pyrimidin Nukleotid um Enn.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) ass ofgeleet vum Aspergillus orjzae, et handelt speziell op den 3'-terminale Phosphat vu Guanin, an d'Spaltplaz ass tëscht dem 3'Phosphat vu Guanin an dem 5'Hydroxyl vun ugrenzend Nukleotiden.D'Endprodukt vun der Reaktioun ass 3'Guanylsäure an Oligonukleotidfragmenter mat 3'Guanylsäure um Enn.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) gouf fir d'éischt aus Kallef Thymusgewebe entdeckt, a säi Kodéierungsgen gouf an Escherichia coli gekloont.Et kann DNA spezifesch degradéieren: RNA Strécke an RNA Hybrid Duplexen, resultéierend zu Oligonukleotiden a Mononukleotiden mat 3'-OH a 5'-Monophosphat Enden, et kann net eenzel- oder duebelstrengend DNA oder RNA ofbauen.

RNase

Funktioun a Gebrauch

Ribonuclease kann d'Degradatioun vu Ribonukleinsäure (RNA) katalyséieren a ka kënschtlech synthetiséiert ginn.Medizinesch Salbe gëtt topesch benotzt fir Trauma a Gelenkschmerzen ze behandelen.Laut Berichter kann Ribonuklease den Hostzellmetabolismus änneren, d'Virussynthese hemmen, d'Prolifératioun vum Grippevirus in vitro hemmen, an d'Bildung vu Vaccinia an Herpesvirus an Poulet Embryonen hemmen.Klinesch Notzung vu Ribonuklease deeglech intramuskulär Injektioun vun 180 mg, profitabel fir d'Behandlung vun Epidemie Ensephalitis, Ribonuklease kann d'Degradatioun vu Ribonukleinsäure (RNA) katalyséieren a kann elo kënschtlech synthetiséiert ginn.Medizinesch Salbe gëtt topesch benotzt fir Trauma a Gelenkschmerzen ze behandelen.Laut Berichter kann Ribonuklease den Hostzellmetabolismus änneren, d'Virussynthese hemmen, d'Prolifératioun vum Grippevirus in vitro hemmen, an d'Bildung vu Vaccinia an Herpesvirus an Poulet Embryonen hemmen.Klinesch Notzung vun Ribonuclease deeglech intramuskulär Injektioun vun 180 mg ass profitabel fir d'Behandlung vun Epidemie Encephalitis.

RNase

Inhibitor Definitioun

Definitioun vun RNase Inhibitor Eenheet: D'Quantitéit un Enzym erfuerderlech fir 50% vun der Aktivitéit vu 5ng RNase A ze hemmen ass eng Eenheet.

Wéi RNase Inhibitoren funktionnéieren

Guanidin Isothiocyanat:

Guanidin Isothiocyanat ass eng organesch Verbindung mat der molekulare Formel C2H6N4S.Haaptsächlech an biologescher Medezin benotzt, chemesch reagents, etc. Guanidine isothiocyanat ass e Protein lysing Agent, an et ass oft als Haaptkomponent vun lysis Léisung an molekulare diagnostic reagents benotzt.Et kann Tissu lyséieren, Zellstruktur zerstéieren an Nukleinsäure vum Nukleoprotein dissoziéieren, an huet eng staark Denaturatioun zu RNase.Et ass den effektivsten RNase Inhibitor am Moment.

TRIzol ass en neien Total RNA Extraktiounsreagens deen direkt total RNA aus Zellen oder Stoffer extrahéiert.Et enthält Substanzen wéi Phenol a Guanidin Isothiocyanat, déi Zellen séier stéieren an Nukleasen hemmen, déi vun Zellen verëffentlecht ginn.

(Allerdéngs ass de Guanidin Isothiocyanat geféierlech fir d'Gesondheet vun de Labo Fuerscher.)

RNAsin:

Seier Glycoprotein extrahéiert aus Ratten Liewer oder Mënsch Blastoderm.Rnasin ass en net-kompetitiven Inhibitor vun RNase, deen u verschidde RNases binde kann fir se ze inaktivéieren.

(Méi Detailer: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hhéich Temperatur:

Héich Temperatur ass och e gemeinsamt Mëttel fir Proteindenaturatioun.

Diethylpyrocarbonat (DEPC):

DEPC ass e staarken awer onkompletten RNase Inhibitor, deen d'RNase Aktivitéit hemméiere kann andeems se mam Aminosaier Imidazolring vun der RNase aktiver Grupp kombinéiert fir Proteinen ze denaturéieren.

Vanadyl Ribonucleoside Komplex:

E Komplex geformt vu Vanadiumoxidionen an Nukleosiden, deen un RNase a Form vun Iwwergangssubstanzen bindt, déi d'Aktivitéit vun RNase bal komplett hemméiere kënnen

aner:

SDS, urea, diatomaceous Äerd, etc.

Expert Rezensiounen

Li Yujie Chef Techniker

Direkter vum Laboratoire Departement, Jiaozhou Spidol, Dongfang Spidol verbonne mat der Tongji Universitéit

Fir d'Biodegradatioun vun exogenen RNase ze vermeiden, sollten Masken, Handschuesch an Hüts gedroen an dacks während dem RNA Extraktiounsprozess ersat ginn.All Glasware muss an engem Trocknerofen bei 200°C fir méi wéi 2 Stonnen gebak ginn.Material fir Baken benotzt, wéi Plastik, musse mat DEPC Waasser behandelt ginn, an duerno mat destilléiert Waasser gewascht ginn.D'Reagenser oder Apparater, déi fir d'Extraktioun, d'Erhaalung an d'Identifikatioun vun der RNA benotzt ginn, solle fir RNA gewidmet sinn, an en onofhängege RNA Operatiounsberäich soll ageriicht ginn.

Referenzen:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Bakterien a Viren am Nasopharynx direkt virum Ufank vun akuten ënneschten Atmungsinfektiounen an Naturvölker australesche Kanner [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Spidol Infektioun Kontroll Branch vun Chinese Präventioun Medezin Association.Richtlinnen fir d'Sammlung an d'Inspektioun vu klineschen mikrobiellen Proben [J].Chinese Journal vun Spidol Infektioun, 2018 (20): 3192-3200.

[3] "Klineschen Test Zéng Dausend Firwat Molekulare Biologie Testvolumen"