Direkt PCR ass eng Reaktioun déi direkt Déieren- oder Planzegewebe benotzt fir Amplifikatioun ouni Nukleinsäure Extraktioun.A ville Weeër funktionnéiert direkt PCR wéi normal PCR

Den Haaptunterschied ass de personaliséierte Puffer, deen am direkte PCR benotzt gëtt, d'Probe kann direkt un der PCR Reaktioun ënnerworf ginn ouni Nukleinsäure Extraktioun, awer et gi entspriechend Ufuerderunge fir d'Toleranz vun den Enzymen an d'Kompatibilitéit vum Puffer, deen an der direkter PCR Reaktioun involvéiert ass.

Och wann et méi oder manner PCR-Inhibitoren a gemeinsame Proben sinn, kann direkt PCR nach ëmmer zouverlässeg Amplifikatioun ënner der Handlung vun Enzymen a Puffer erreechen.Déi traditionell PCR Reaktioun erfuerdert héichqualitativ Nukleinsäure als Schabloun, wat de glate Fortschrëtt vun der PCR Reaktioun hemméiere kann wann d'Schabloun Proteinen an aner Gëftstoffer enthält.Direkt PCR ass de Moment eng vun de méi populär Technologien am Beräich vun der molekulare Diagnostik.

01 Direct PCR gouf ursprénglech fir Déieren a Planzen benotzt

Déi fréizäiteg Uwendung vun direkten PCR ass am Beräich vun Déieren a Planzen, sou wéi Blutt, Tissu an Hoer vun der Rat, Kaz, Poulet, Kanéngchen, Schof, Ranner, asw., Planzenblieder a Somen, asw.

Dës Felder hunn e puer gemeinsam Fonctiounen, dat ass, der Zil- Gen Inhalt ass relativ héich an Nukleinsäure Extraktioun ass stéierend, sou direkt PCR kann net nëmmen Zäit spueren an e klengen Impakt op d'Resultater hunn, mä och Käschten spueren.

Direkt PCR benotzt fir Pathogenerkennung ass eng Saach vu leschte Joeren, e puer PCR Reagens Hiersteller hu vill Efforten an dëser Richtung gemaach wann se Innovatioun maachen.Besonnesch an dëser COVID-19 Epidemie si vill esou Detektiounsprodukter um Maart erschéngen, sou wéi SARS-CoV-2 Nukleinsäure Detektioun Kit (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) recherchéiert an entwéckelt vu Foregene, déi Echtzäit RT PCR Technologie (rRT-PCR) benotzt fir qualitativ Detektioun vu SARS-Coopharynge- oder Swan-Sauer Probe an der mënschlecher Sauer s.

Foregene ass eng vun de Firmen déi Direct PCR Technologie benotzen, fir d'Detektioun vun normalen ORF1ab, N, E, anVariant Lineages Nukleinsäuren a mënschlechen Nasopharyngeal oder Oropharyngeal Swab Echantillon wéi SARS-CoV-2 B.1.1.7 Lineage (UK), B.1.351 Lineage (ZA), B.1.617 Lineage (IND) a P.1 Lineage (BR).

02  Reagens fir direkt PCR néideg

Probe Lysat

D'Probelysat kann vun Iech selwer konfiguréiert ginn oder kaaft ginn.Den Ënnerscheed an der Zesummesetzung vu verschiddene Marken vu Lysat wäert d'Lyséierungsfäegkeet anescht maachen, an da gëtt d'Lyséierungszäit liicht anescht.Zum Beispill, fir d'Virbereedung vun Déier Tissue Echantillon, 30 Minutten oder Iwwernuechtung Lysis ass allgemeng recommandéiert, an der Lysis Léisung fir Viren rangéiert vun 3-10 Minutten.

PCR Master Mix

Et ass recommandéiert Hot-Start DNA Polymerase ze benotzen fir spezifesch Amplifikatioun ze verbesseren an d'Verstäerkungsfäegkeet ze erhéijen.De Kär vum direkten PCR ass eng héich tolerant Polymerase.

Eliminéiert oder hemmt Komponenten an der Probe déi DNA Amplifikatioun beaflossen

Nodeems d'Probe mam Lysat veraarbecht gëtt, ginn Proteinen, Lipiden an aner Zellschutt fräigelooss, dës Substanzen hemmen d'PCR Reaktioun.Dofir erfuerdert direkt PCR d'Zousatz vun entspriechender Entfernung oder Inhibitoren fir den Afloss vun dëse Faktoren ze reduzéieren.

03  Eng Sammlung vu fënnef Wëssenspunkte vum direkten PCR

Als éischt ass Direct PCR Technologie eng direkt PCR Technologie fir verschidde biologesch Proben.Ënnert dësem techneschen Zoustand ass et net néideg d'Nukleinsäure ze trennen an ze extrahieren, direkt d'Gewëssprobe als Objet ze benotzen, an d'Zil-Gen-Primer bäizefügen fir d'PCR-Reaktioun auszeféieren.

Zweetens, Direct PCR Technologie ass net nëmmen eng traditionell DNA Template Amplifikatioun Technologie, awer enthält och RNA Template ëmgedréint Transkriptioun PCR.

Drëttens, Direct PCR Technologie mécht net nëmmen direkt routinéiert qualitativ PCR Reaktiounen op Tissue Echantillon, awer enthält och Real-Time qPCR Reaktiounen, wat de Reaktiounssystem erfuerdert fir staark Anti-Hannergrond Fluoreszenz Interferenzfäegkeet ze hunn an endogen Fluoreszenz quenchers d'antagonistesch Fäegkeet.

Véierten, d'Proben, déi vun der Direct PCR Technologie gezielt sinn, brauche just d'Verëffentlechung vun Nukleinsäure Templates, a läschen keng Proteinen, Polysacchariden, Salzionen, etc., déi d'PCR Reaktioun stéieren.Wat erfuerdert datt d'Nukleinsäurepolymerase a PCR Mix am Reaktiounssystem exzellent Resistenz an Adaptabilitéit hunn fir Enzymaktivitéit a Replikatiounsgenauegkeet ënner komplexe Bedéngungen ze garantéieren.

Fënneftens ass d'Tissueprobe gezielt vun der Direct PCR Technologie ouni Nukleinsäureberäicherungsbehandlung an d'Quantitéit vun der Schabloun ass ganz kleng, wat erfuerdert datt de Reaktiounssystem extrem héich Sensibilitéit an Amplifikatiounseffizienz huet.