RNase ass e sensibelt Wuert dat vill Studenten déi dacks RNA Extraktiounsexperimenter maachen net wëllen héieren.Voll bewaffnet gouf d'RNA, déi endlech mat den héich gëftege Reagenser Phenol a Chloroform extrahéiert gouf, ofgebaut.Ech sinn net versöhnt!!!Haut kucke mer den Urspronk vum berühmten Rnase.

Ribonuclease (RNase), oder RNase, ass eng Nuklease déi RNA a kleng Moleküle hydrolyséiere kann.RNase, als klengt Molekülprotein, ass ongewéinlech stabil .Konventionell Héichtemperatur an Héichdrock Dampsteriliséierung a Protein Inhibitoren kënnen et net komplett inaktivéieren.D'Stabilitéit vum RNase kënnt haaptsächlech vun den Disulfidbindungen an der Struktur.Zum Beispill huet déi allgemeng benotzt RNase vu Rëndfleesch Bauchspaicheldrüs nëmmen 124 Aminosäuren, awer enthält 4 Disulfidbindungen.Schwefelbindung an Disulfidbindung ginn RNase mat exzellenter thermescher Stabilitéit.Zousätzlech huet rnase e relativ klengt Molekulargewiicht a ka séier seng ursprénglech Konformatioun a ville Fäll restauréieren.

Zousätzlech zu extrem stabil ze sinn,RNases sinn iwwerall am Laboratoire .RNase ass e biologesche Verteidegungsmechanismus.Fir eng Zell ass exogen RNA dacks fatal.Am Verglach mat exogener DNA ass exogen RNA dacks méi geféierlech.RNA gëtt glécklech transkribéiert an iwwersat, sou datt bal all Organismen RNases entwéckelt hunn fir géint d'Invasioun vun exogener RNA ze verteidegen.Dofir sinn d'Bakterienzellen, déi am Labo kultivéiert ginn, an Dir, déi RNA extrahéiert, den Aroma vun RNase ausstrahlen.Mënschleche Kierperflëssegkeeten (Spigel, Tréinen, etc.) enthalen eng grouss Quantitéit RNase, also kräischen net wann d'RNA ofgebaut gëtt.Wat Dir méi kräischt, wat méi schlëmm ass d'RNA-Degradatioun!!Schwëster Daiyu ass net gëeegent fir RNA Extraktioun!

Zousätzlech enthält Är delikat Haut och vill RNase, an d'Markéierer, Pipetten, Frigodieren an Dierhandtaken, déi vun der Haut beréiert goufen, enthalen och RNase.

Mat sou vill Rambling, loosst eis kucken wéi mir mat RNases ëmgoen.

Déi éischt Saach un déi jidderee denkt wann Dir RNA ewechhuelt assDEPC(diethylpyrocarbonat).DEPC denaturéiert haaptsächlech de Protein andeems se mam Imidazolring vun der RNase aktiver Grupp Histidin kombinéiert ginn, doduerch d'Aktivitéit vum Enzym hemmt.0,1% DEPC kann e besseren Entfernungseffekt op Rnase hunn, awer mir musse oppassen datt DEPC e bekannte Karzinogen ass, also sollt besonnesch Opmierksamkeet bezuelt ginn wann Dir se benotzt.

Fir RNase musse mir vun zwee Aspekter ufänken,déi éischt ass d'Aktivitéit vun endogene RNase ze hemmen

Konventionell RNA Extraktiounsreagens wéi Guanidin Isothiocyanat an DTT am Trizol enthale kënnen d'Disulfidbindung vun RNase opmaachen, awer et sinn nach ëmmer e Rnasen, besonnesch an Tissueproben, also oppassen op déi niddreg Temperatur.

1.Taucht direkt d'Tissueprobe a flëssege Stickstoff nodeems se se erausgeholl hunn, oder an enger kommerziell RNA Konservéierungsléisung.

2.Nodeems Dir d'RNA vun der Zellprobe extrahéiert hutt, fügen se an d'Lyse-Léisung a lyse se op d'Äisbox

3. Et ass am beschten fir flësseg Stickstoff fir Schleifen ze benotzen wann Tissueproben homogeniséiert ginn.Wann Dir en elektresche Homogenisator ouni flëssege Stickstoff benotzt, oppassen op d'Virkillung vum Homogenatadapter.

Déi zweet ass exogen DNase

1.Sidd voll bewaffnet, drot e Labo-Mantel un, drot eng Mask un, a gitt sécher e puer nei Handschuesch un (sief net sou spuersam!! Et sollt bemierkt datt Trizol super ätzend ass, an et ass och ganz staark duerch Handschuesch, also net op d'Hänn drénken).

2.All déi benotzt Pipette Tipps, EP Tubes, PCR Tubes an aner Ausrüstung mussen de-RNase behandelt ginn.Et kann an 0,1% DEPC getäuscht ginn an dann ënner héijen Drock gesat ginn.Opgepasst op d'Operatioun an engem Dampkapp.Lokal Tyranne kënnen direkt Verbrauchsmaterial kafen fir Enzymen ze läschen.

PS: Loosst mech Iech eng faul Method soen.Obwuel héich Temperatur an héich Drock kann net komplett ewechzehuelen RNase, et wäert e groussen Deel vun et ewechzehuelen.2 Mol vun héijer Temperatur an héijen Drock huet e gudden Effekt, an d'Extraktioun vu RNA huet wéineg Effekt.

3.Alkohol kann Proteinen denaturéieren,sou datt d'RNA Extraktiounstabelle mat 75% Alkohol geläscht ka ginn , an Handschuesch kënnen och mat Alkohol gesprëtzt ginn.

4.D'Finale RNA Opléisung Léisung an Zentrifuge Rouer soll och de-RNase behandelt ginn.DEPC Waasser ass eng allgemeng benotzt RNA Opléisungsléisung.Loosst eis iwwer déi richteg Virbereedungsmethod vum DEPC Waasser schwätzen (erënnert un de kommerziellen DEPC nei ze packen wann Dir et kaaft)

Füügt DEPC an ultrapure Waasser bei 1:1000, schüttelen gutt, loosst iwwer Nuecht bei 37 ° C stoen, a steriliséiert bei 121 ° C ënner héijer Temperatur an héijen Drock fir 15 Minutten.DEPC Waasser kann bei -20 ° C an 1ml aliquots gespäichert ginn.

Schlussendlech, fir ze resuméieren: niddreg Temperatur ass de Schlëssel, Verbrauchsmaterial gëtt gutt gehandhabt, voll bewaffnet a manner geschwat!

Gutt, dat ass et fir d'Strategie vun haut.Ech wënschen Iech all d'RNA Konzentratioun a Rengheet, déi Dir ugeschwat hutt.Béid A260/A280 sinn 2.0!!!

Natierlech, wann Dir eng benotztRaumtemperatur Operatioun RNA Extraktioun Kit, Dir kënnt net déi uewe genannte Probleemer begéinen.

Operatioun bei Raumtemperatur, ouni DNase derbäi ze ginn, extrahéiert total RNA aus Zellen an 11 Minutten, an extrakt total RNA aus Déieregewebe oder Planzen an 30 Minutten.

Fir Testproben, kontaktéiert w.e.g.:overseas@foregene.com

Zesummenhang Produkter:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/