Déi aussergewéinlech Feature vun der PCR Reaktioun ass seng grouss Amplifikatiounskapazitéit an extrem héich Empfindlechkeet.Fir d'PCR-Performance an d'Erkennungseffizienz ze verbesseren, verpflichte mir d'PCR-Verstärkungskapazitéit an d'Erkennungsempfindlechkeet ze verbesseren, awer de Kappwéi ass am Prozess vum Experiment.Falsch Positiver kommen dacks op, an eng ganz kleng Quantitéit vu Probe-Kräizkontaminatioun oder PCR-Produktkontaminatioun kann falsch Positiver am Experiment verursaachen.
Fënnef Aarte vu PCR Produktkontaminatioun
Et gi vill Grënn fir PCR Kontaminatioun, déi ongeféier an déi folgend Kategorien opgedeelt kënne ginn:
Exemplarkontaminatioun gëtt haaptsächlech duerch d'Kontaminatioun vum Container verursaacht fir d'Exemplar ze sammelen, oder wann d'Exemplar plazéiert ass, gëtt et aus dem Container duerch lockere Versiegelung geleckt, oder d'Exemplar gëtt op d'Äussere vum Container festgehalen, wat d'Kreuzkontaminatioun verursaacht;Kontaminatioun féiert zu Kontaminatioun tëscht Exemplare;e puer mikrobielle Exemplare, besonnesch Viren, kënne sech mat Aerosole verbreeden oder Aerosole bilden, wat zu enger géigesäiteger Kontaminatioun resultéiert.
Den Haaptgrond ass datt während der Virbereedung vu PCR-Reagenser d'Probe Pistoul, Container, duebel destilléiert Waasser an aner Léisunge kontaminéiert sinn duerch d'PCR Nukleinsäure Schabloun.
A molekulare Biologie Laboratoiren an e puer Laboratoiren déi gekloonten Plasmide als positiv Kontrollen benotzen, ass de Problem vun der geklooner Plasmidkontaminatioun och heefeg.Well den Inhalt vum Klonende Plasmid am Eenheetsvolumen zimlech héich ass, a méi Tools a Reagenzë sinn am Reinigungsprozess gebraucht ginn, an de Plasmid a liewegen Zellen ass ganz wahrscheinlech kontaminéiert wéinst dem staarke Wuesstum a Reproduktiounsfäegkeet vu liewegen Zellen.
D'Kontaminatioun vu verstäerkte Produkter ass deen heefegste Kontaminatiounsproblem bei PCR Reaktiounen.Well d'Kopie Quantitéit vum PCR Produkt grouss ass (normalerweis 1013 Exemplare / ml), wat vill méi héich ass wéi d'Limite vun der PCR Detektioun Kopie Zuel, eng ganz kleng Quantitéit vun PCR Produit Kontaminatioun kann falsch Positiven Ursaach.
Aerosolverschmotzung ass déi wahrscheinlechst Form vu Kontaminatioun vu PCR Produkter, an et ass och am einfachsten ze ignoréieren.Et gëtt geformt duerch d'Reibung tëscht der flësseger Uewerfläch an der Loft.Allgemeng kann Aerosolkontaminatioun geformt ginn wann den Deckel opgemaach gëtt, wann d'Probe aspiréiert gëtt oder souguer wann d'Reaktiounsröhre kräfteg gerëselt gëtt.Laut Berechnungen kann en Aerosolpartikel 48.000 Exemplare enthalen, sou datt d'Verschmotzung doduerch e Problem ass, dee besonnesch Opmierksamkeet verdéngt.
Besonnesch Testlaboratoiren benotzen dacks datselwecht Paar Primer fir e bestëmmte Gen ze testen.Mat der Zäit wäert eng grouss Quantitéit vu PCR Produktkontaminatioun am Laborraum optrieden.Wann esou Kontaminatioun geschitt ass, ass et schwéier et a kuerzer Zäit ze eliminéieren.
Fir déi éischt dräi Zorte vu Verschmotzung kënne mir effektiv Mëttele benotzen fir ze vermeiden, awer d'Verschmotzung duerch PCR Produkter ass schwéier ze verhënneren, besonnesch am Bau vun net-Standard PCR Laboratoiren.Am PCR-Prozess, wann de Pipette-Spëtzt d'Flëssegkeet saugt a bléist, an de PCR-Rouerdeckel opgemaach gëtt, gëtt en Aerosol geformt.D'DNA-Moleküle, déi vum Aerosol gedroe ginn (eng Aerosol kann zéngdausende vun DNA droen) si schwéier ze eliminéieren, well se an der Loft schwiewen.Wann déi nächst Ronn vun PCR Experimenter agefouert ginn, falen positiv wäert zwangsleefeg geschéien.
Wéi an der Figur hei ënnen gewisen, huet déi negativ Kontroll och déi entspriechend Band vun Interesse verstäerkt:
Den éischten Deel vun dësem Thema vun der PCR Verschmotzung a Präventioun gëtt hei agefouert.Déi nächst Ausgab bréngt Iech den zweeten Deel "Préventioun vu PCR Produktkontaminatioun", also bleift ofgeschloss!
Post Zäit: Jul-25-2017
