Etabléiert PCR Experiment SOP fir d'Behuele vum Experimentpersonal ze standardiséieren.
Den Experimenter hält sech strikt un d'Operatiounsprozeduren, a miniméiert d'PCR-Verschmotzung, déi vu mënschleche Faktore verursaacht ka ginn oder d'Optriede vu Verschmotzung verhënnert.Zousätzlech, soll den Experimenter déi entspriechend berufflech Wëssen a Fäegkeeten hunn, dorënner Kompetenzen am Betrib Zesummenhang Ausrüstung, klären de ganzen Aarbecht Prozess, Meeschter um Behandlung Methoden vun Kontaminatioun an Laboratoire Qualitéitskontroll Methoden, a kënnen d'Test Resultater korrekt interpretéieren.
Etabléiert e Standard PCR Laboratoire.
PCR Laboratoire ass am Prinzip a véier Beräicher opgedeelt, nämlech Reagenspräparatiounsberäich, Probeveraarbechtungsberäich, Amplifikatiounsberäich, an Amplifikatioun Produktanalyseberäich.Déi éischt zwee Beräicher sinn Pre-amplification Beräicher, an déi lescht zwee Beräicher sinn Post-amplification Beräicher.D'Pre-amplification Zone an der Post-amplification Zone soll strikt getrennt ginn.Experimentell Materialien, Reagenzen, Opnampabeier, Stëfter, Botzmaterialien, asw., kënnen nëmme vum Pre-Amplifikatiounsberäich an d'Post-Amplifikatiounsberäich fléissen, dat heescht, vum Reagenspreparatiounsberäich → Probeveraarbechtungsberäich → Verstäerkungsberäich → Amplifikatiounsproduktanalyseberäich, a däerf net no hannen fléissen.De Loftfloss am Laboratoire soll och vum Pre-Amplifikatiounsberäich an d'Post-Amplifikatiounsberäich fléissen, an net no hannen fléissen.Den ideale PCR Laboratoire Design gëtt hei ënnen gewisen:
Figur A: Ideal PCR Laboratoire Setup Modus mat negativen Drock am Pufferraum
Figur B: Ideal PCR Laboratoire Setup Modus mat Positiven Drock am Pufferraum
D'PCR Laboratoire Setup Diagrammer, déi an der Figur A an der Figur B ginn, sollten e méi ideale Setupmodus sinn, an de Laboratoire mat Konditioune kann op dëse Modus fir Design bezéien.Fir gewéinlech Laboratoiren ass et recommandéiert datt d'PCR-Verstäerkungsberäich an d'Produktanalyseberäich getrennt kënne ginn, an d'Ouverture vum Cover soll sou vill wéi méiglech reduzéiert ginn am Probevirbereedungsberäich an am PCR Amplifikatiounsberäich.Denkt drun: Produkter an experimentell Ëmgeréits am Produktanalyseberäich sinn strikt verbueden fir an d'Probepräparatiounsberäich an d'PCR-Verstärkungsberäich geholl ze ginn.
Wann de Laboratoire nëmmen PCR Detektioun an Identifikatioun ausféiert, ass et recommandéiert fluoreszent quantitative PCR ze benotzen anstatt konventionell PCR.
Fluoreszenz quantitativ PCR Detektiounsresultater kënne gesammelt an analyséiert ginn duerch Fluoreszenzsignaler, sou datt et net néideg ass den Deckel fir Elektrophorese no der Reaktioun opzemaachen, wat d'PCR Produktkontaminatioun vermeit, déi duerch d'Lecke vu Reaktiounsprodukter verursaacht gëtt fir Aerosolen ze bilden.Wann Dir d'Zuel vun de Kappöffnunge während dem Luede Schrëtt vun der Gelelektrophorese erhéicht, ass Aerosolkontaminatioun méiglecherweis optrieden.Et ass recommandéiert d'Applikatioun vu quantitative PCR ze förderen a graduell qualitative PCR ze ersetzen.
Den UNG Anti-PCR Produktkontaminatiounssystem gëtt fir d'PCR Reaktioun benotzt.
De System benotzt dUTP amplaz dTTP.No der PCR Reaktioun sinn all PCR Produkter (DNA Fragmenter) mat dUTP agebaut;an der nächster Ronn vun der PCR-Reaktioun gëtt den UNG-Enzym, deen an de System bäigefüügt gëtt, bei 37 ° C fir 5 Minutte virum PCR inkubéiert, wat spezifesch all DNA-Fragmenter mat dUTP ofbaue kann an dann PCR-Reaktioun ausféieren.Dëst kann d'Aerosolkontaminatioun komplett ewechhuelen, déi duerch PCR Produkter verursaacht gëtt.Den Effekt gëtt an der Figur hei ënnen gewisen:
Notiz: Fir déi direkt PCR Serie kënnt Dir d'Serie Produkter vum Anti-PCR Produktkontaminatiounssystem vu Foregene wielenProposéieren
Fir Laboratoiren déi grouss-Skala Genotyping Tester maachen, ass et staark recommandéiert den UNG Anti-PCR Produktkontaminatiounssystem ze benotzen fir Reagenzen ze testen nieft dem Bau vu raisonnabelen Laboratoiren.
Erënnerung: D'Benotzung vun dësem System kann d'PCR-Produktkontaminatioun net ewechhuelen, déi scho verursaacht gouf.Dofir soll den UNG System am Ufank vum relevanten Test benotzt ginn, an den UNG System soll fir PCR Verstäerkung benotzt ginn, sou datt d'Kontaminatioun vu PCR Produkter Falsch Positiv verhënneren.
Et ass recommandéiert den Direct PCR-UNG System vu Foregene ze benotzen wann Dir grouss Skala Tester mécht, wéi:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG;
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Dës Serie vu Kits vu Foregenekann net nëmmen PCR Detektioun séier a grouss Skala Leeschtunge, mä och effektiv PCR Produit Kontaminatioun verhënneren a kontrolléieren.
Post Zäit: Mar-19-2021
