Féierung

Laang net-kodéierend RNA, lncRNA ass eng net-kodéierend RNA mat enger Längt méi wéi 200 Nukleotiden, allgemeng tëscht 200-100000 nt.lncRNA reguléiert Genausdrock op epigenetesch, Transkriptiouns- a Post-Transkriptiounsniveauen, a bedeelegt sech un X Chromosom Silencing, Genom Imprinting a Chromatin Modifikatioun, Transkriptiounsaktivéierung, Transkriptiounsinterferenz, Nukleartransport, Zellzyklusregulatioun, Zelldifferenzéierungsreguléierung, an Dosiskompensatiounseffekter fir vill aner Kompensatiouns-Effekter ze verhënneren, Ion vu mënschleche Krankheeten, a sinn am Moment ee vun de Hotspots am Beräich vun der Biomedizin.

01  Aarte a Charakteristike vu LncRNA

lncRNA ass a villen Typen opgedeelt no de verschiddene Quelle vu senger Formation, wéi an der Figur hei uewen gewisen.Huet déi folgend Charakteristiken:

1. lncRNAs sinn normalerweis méi laang, mat dynamesche Ausdrock a verschiddene Splicing Methoden während Differenzéierung
2. Am Verglach mat Kodéierungsgenen huet lncRNA normalerweis e méi nidderegen Ausdrockniveau
3. Déi meescht lncRNAs hunn offensichtlech temporär a raimlech Ausdrock Spezifizitéit am Prozess vun der Tissue Differenzéierung an Entwécklung
4. Et gi charakteristesch Ausdréck an Tumoren an aner Krankheeten
5. Déi subzellulär Plazen vun lncRNA sinn divers
6. D'Sequenz ass niddereg an der Konservatioun, awer d'Funktioun huet e gewësse Grad vu Konservatioun, etc.

02 Oft gestallte Froen iwwer LncRNA Reverse Transkriptioun

Wéinst dem nidderegen Inhalt vun lncRNA an Zellen, laang Längt an héich-Niveau Struktur, esou RNA huet dacks komplex Strukturen wéi Stammschleifen oder Hoerpinselen, an RT-qPCR ass ufälleg fir Problemer vun net erfollegräich ëmgedréint Transkriptiouns oder niddereg Effizienz.

03 LncRNA ëmgedréint Transkriptiounsléisung

An der zentraler Regel gëtt de Prozess vun RNA Virussen, déi hir eege ëmgedréint Transkriptase benotzen fir DNA mat RNA als Schabloun ze synthetiséieren, ëmgedréint Transkriptioun genannt.De Prozess fir RNA Virus ëmgedréint Transkriptase ze benotzen fir cDNA Template in vitro ze synthetiséieren gëtt ëmgedréint Transkriptioun genannt.D'Haaptelementer, déi am Reverse Transkriptiounssystem abegraff sinn: RNA Template, Reverse Transkriptase, Primer an aner Komponenten.

1.RNA Schabloun

Den Afloss vun der RNA Template op ëmgedréint Transkriptioun spigelt sech a senger Struktur, Rengheet an Integritéit.Wat méi héich d'Rengheet an d'Integritéit vum extrahéierten RNA ass, dest méi héich ass d'Effizienz vun der ëmgedréint Transkriptioun an déi méi genee déi spéider quantitativ Resultater.D'RNA gereinegt duerch allgemeng benotzt RNA Extraktiounsreagens enthält dacks Iwwerreschter vun Alkohol a Guanidinsalze, déi e staarken hemmend Effekt op déi meescht ëmgedréint Transkriptase hunn.

2.Reverse Transkriptase

Reverse Transkriptase huet e Schlëssel Afloss am ganze Reverse Transkriptiounssystem.Déi gëeegent Temperatur fir de Reverse Transkriptase, deen an de meeschte Laboratoiren benotzt gëtt, ass allgemeng 42 ° C.Tatsächlech erfuerdert d'Ouverture vun der héijer RNA Struktur eng méi héich Temperatur, an d'Ufuerderunge fir de Reverse Transkriptase si méi héich.

3.Primer

Reverse Transkriptiounsprimer enthalen genspezifesch Primer, zoufälleg Primer an Oligo dT Primer.Déi meescht lncRNAs enthalen keng polyA Schwänz, an et ass wichteg déi zoufälleg Primer mat Oligo dT richteg ze passen.

4.Aner Komponenten

Am Hibléck vun der Tatsaach, datt RNA besonnesch einfach ze degradéieren ass, kann d'Aféierung vu Komponenten am ëmgedréint Transkriptiounssystem miniméiert ginn, wat effektiv d'Entrée vun der RNase verhënneren an de glate Fortschrëtt vun der ëmgedréint Transkriptioun garantéieren.

Foregenkritt aus RNA Template, ëmgedréint Transkriptioun op qPCR

Eskortéiert Är lncRNA Detektioun ëmfaassend

Déier Total RNA IsolationKit (mat gDNA Entfernungskolonn)

Zell Total RNA IsolationKit (mat gDNA Entfernungskolonn)

Lnc-RT HeroTM I (Mat gDNase) (Super Premix fir éischt-Sträng cDNA Synthese vun lncRNA)

Echtzäit PCR EasyTM-SYBR Gréng I

AVirdeeler ofRNA Extraktioun:

De Kit benotzt d'drëtt Generatioun RNA Extraktiounstechnologie, net néideg DNase ze benotzen.

11 Minutte vun 96, 24, 12, a 6-Well Plack cultured Zellen, héich-Effizienz Extraktioun vun gDNA-gratis, héich-Rengheet, héich-Qualitéit total Zell RNA.

Virdeeler vun lncRNA ëmgedréint Transkriptioun:

E Reverse Transkriptiounssystem speziell fir LncRNA entwéckelt fir séier genomesch DNA Kontaminatioun ze läschen.

De Reverse Transkriptiounssystem huet héich thermesch Stabilitéit an huet nach ëmmer gutt Reverse Transkriptiounsleeschtungen bei 50 ° C.

Schablounen mat héich GC Inhalt a komplex sekundär Struktur kann mat héich Effizienz ëmgedréint ginn.

Virdeelerof qPCR:

Hot Start Foregene Taq Polymerase huet méi héich Verstäerkungseffizienz, méi héich Verstäerkungsempfindlechkeet, a méi héich Verstäerkungsspezifizitéit

Déi optimiséiert Real PCR Easy Mix mécht SYBR Green I méi héich Detektiounsempfindlechkeet, a seng Fluoreszenzintensitéit ass 3-5 Mol déi vun ähnlechen Produkter, déi d'Bedierfnesser vun verschiddenen Zorte vu Fluoreszenz quantitativen Experimenter entspriechen.