Tipps fir d'Verbesserung vun der Glue Recovery

1. Erhéije d'Probebelaaschtung während der Elektrophorese.

2. Benotzt frësch preparéiert Elektrophorese-Puffer.

3. Wann Dir Klebstoff schneiden, probéiert nëmmen de Klebstoff mat Streifen ze schneiden fir de Volume vum Klebschneider ze reduzéieren: brauch kee Klebstoff mat e puer Zweck Fragmenter, soss wäert et d'Erhuelungsquote beaflossen.

4. Nodeems Dir zwee oder méi Stécker vu Klebstoff geschmëlzt hutt, benotzt e Röhre egal wéi grouss de Volume ass a transferéiert se an déiselwecht Kolonn.

5. D'Léisung, déi an der Sol bäigefüügt gëtt, kann e bësse méi sinn, wat méi fir d'Bindung vun der DNA un d'Membran bäidréit, awer allgemeng net méi wéi 750ul.

6. De Schlëssel fir d'Gel Erhuelung ass d'DNA an d'Kolonn ze binden duerch d'Salzkonzentratioun, d'Aciditéit (Laascht) an d'Hydrophobie vun der Léisung an der Kolonn.Dofir, wann de pH vum Elektrophorese-Puffer ze héich ass, kann 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) an d'Sol bäigefüügt ginn;fir DNA Molekülen op der Membran besser z'ënnerfangen, kënnen 30% Isopropanol derbäigesat ginn fir an d'Flëssegkeet ze hëtzen nodeems de Klebstoff opgeléist gouf.

7. Ier Dir d'Eluent bäidréit, léisst d'Kolonn bei Raumtemperatur fir e puer Minutten (ongeféier 10 Minutten) fir den Ethanol komplett ze verdampen.

8. Schlussendlech fügen se manner eluent derbäi fir den Erhuelungsvolumen ze minimiséieren.Am allgemengen gëtt 30-50μl Eluent fir d'Elutioun benotzt (net ze wéineg, soss wäert et net fäeg sinn d'Membran naass ze maachen, wat net fir d'Elutioun bäidréit);d'Elutiounsdrëpsen sinn am Zentrum vun der Membran, fir d'DNA, déi un d'Membran gebonnen ass, komplett ze elueren.

9. Nodeems d'Eluent bäigefüügt gëtt, kann et an engem Waasserbad vu 55-Grad fir 5-Minuten eluéiert ginn oder an engem Waasserbad vu 50-Grad fir méi wéi 10-Minuten plazéiert ginn oder mat engem Parafilm bei 4-Grad Iwwernuechtung versiegelt ginn, an dann den nächsten Dag fir d'Erhuelung centrifugéiert ginn, den Effekt ass gutt.

10.Fügt d'Zentrifugert Eluat zréck an d'Adsorptiounskolonne a centrifugéiert erëm.

Detailléiert Methoden a Prozedure fir PCR Produkt Erhuelung

1. Gewéinlech Gummistécker Recycling

Wann Dir de Klebstoff wëllt recuperéieren, ass et am beschten e Kit ze benotzen, dee praktesch ass an e bësse méi héich Erhuelungsquote huet.Wann Dir et wierklech manuell recuperéiere musst, kënnt Dir 3 Mol de Volume vun TE addéieren nodeems Dir de Klebstoff geschnidden hutt.Nom Schmelzen an engem Waasserbad ginn Phenol, Phenol/Chloroform propper extrahéiert, an Ethanol gëtt ausfällt.Dat ass et.

2. DNA Erhuelung aus niddereg Schmelzpunkt gels

Purification vun DNA Fragmenter Fügt TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol/l EDTA) gläich mam Volume vum Gel, a setzt 5 Minutten an engem 65°C Waasserbad fir de Gel komplett opzeléisen.

Nodeems et op Raumtemperatur bruecht gouf, gouf eng gläichberechtegt Quantitéit vu Phenol (gesättegt mat TE, TE an der ieweschter Schicht versiegelt, an déi ënnescht Schicht vum Phenol gouf geläscht) bäigefüügt, an d'Mëschung gouf sanft gemëscht (keng Vermëschung erfuerderlech), an centrifugéiert bei 12.000 rpm fir 3 Minutten.Widderhuelen 1-2 Mol.

Huelt de Supernatant, füügt 0,1 Volumen vun 3mol / L Natriumacetat (pH 5,2) an 2,5 Mol Volumen vun absolut Ethanol derbäi fir Ethanol Nidderschlag auszeféieren.Opléisen der gereinegt DNA mat engem passenden Quantitéit vun TE, Mooss den Inhalt, a preparéieren fir benotzen (et kann fir Zil Genen Struktur Analyse benotzt ginn, Sonde Virbereedung, etc.).

3. PCR Erhuelung mat gudder Amplifikatioun Spezifizitéit

Wann d'Spezifizitéit vun der PCR Amplifikatioun gutt ass, ass et just eng einfach Reinigung an Erhuelung vum PCR Produkt.Dir kënnt 50ug/ml Proteinase K zum PCR Produkt addéieren, 37 Grad fir 1h, eemol mat Phenol / Chloroform extrahéieren, eemol mat Chloroform extrahéieren, a 0,1 Volumen vum Supernatant addéieren.Den Natriumacetat gouf duerch Nidderschlag mat 2,5 Bänn vun absoluten Ethanol erëmfonnt.

Zesummenhang Produkter:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/