Steriliséierung vu Pipette-Spëtze an EP-Réier, asw.

1. Bereet 0,1% (een dausendsten) DEPC (héich gëfteg Substanz) mat deioniséiertem Waasser, benotzt se virsiichteg an engem Dampkapp, a späichert et bei 4 ° C ewech vum Liicht;

DEPC Waasser ass reng Waasser behandelt mat DEPC a steriliséiert duerch héich Temperatur an héijen Drock.Getest fir fräi vu RNase, DNase a Proteinase ze sinn.

2. Setzt de Pipette-Spëtzt an den EP-Röhre an 0,1% DEPC, a suergt dofir datt de Pipette-Spëtzt an den EP-Röhre mat 0,1% DEP gefüllt sinn.

3. Schützt virum Liicht, loosst stoen, iwwer Nuecht (12-24h)

4. D'Këscht mat der Spëtzt an den EP-Röhre muss net an DEPC erwächt ginn.Nodeems Dir d'DEPC Waasser am Tipp oder EP Tube ongeféier ewechgeholl hutt, packt et a wéckelt et.

5. 121 Grad Celsius, 30min

6. 180 Grad Celsius, dréchen fir e puer Stonnen (op d'mannst 3 Stonnen)

Note: a.Drot Latex Handschuesch a Masken beim Ëmgank mat DEPC!b, oder ouni DEPC Sterilisatioun, 130 ℃, 90min Autoklav (vill Laboratoiren héich Temperatur Sterilisatioun zweemol)

RNA Extraktioun Considératiounen

Zwee grouss Phänomener vum Tissu RNA Isolatiounsfehler

RNA Degradatioun a Reschter vu Gëftstoffer a Stoffer,Wat d'Degradatioun ugeet, loosst eis als éischt kucken firwat RNA aus kultivéierten Zellen extrahéiert ass net einfach ofgebaut gëtt.Bestehend RNA Extraktiounsreagenz enthalen all Komponenten déi RNase séier hemmen.Füügt de Lysat an d'Kulturzellen, a mëscht et einfach, all d'Zellen kënne grëndlech mam Lysat gemëscht ginn, an d'Zellen si komplett lyséiert.Nodeems d'Zellen lyséiert sinn, hemmen déi aktiv Zutaten am Lysat direkt d'intrazellulär RNase, sou datt d'RNA intakt bleift.Dat heescht, well déi kultivéiert Zellen liicht a voll mam Lysat kontaktéiert ginn, gëtt hir RNA net einfach ofgebaut;op der anerer Säit ass d'RNA am Tissu liicht degradéiert well d'Zellen am Tissu net einfach sinn de Lysat séier ze kontaktéieren.wéinst genuch Kontakt.Also,unzehuelen datt et e Wee gëtt fir den Tissu an eng eenzeg Zell ze maachen wärend d'RNA Aktivitéit hemmt, de Problem vun der Degradatioun kéint komplett geléist ginn.

Flësseg Stickstoffmillen ass déi effektivst esou Method.Wéi och ëmmer, d'Flësseg Stickstoffmillungsmethod ass ganz lästeg, besonnesch wann d'Zuel vun de Proben grouss ass.Domat koum déi nächst bescht Saach: den Homogenisator.DéihomogenisatorMethod berücksichtegt d'Fro net wéi d'RNase Aktivitéit hemmt gëtt ier d'Zellen mam Lysat kontaktéiert ginn, awer bitt éischter datt den Taux vun der Tissue Stéierung méi séier ass wéi den Taux bei deem intrazellulär RNase RN degradéiert.

Den Effekt vum elektresche Homogenisator ass besser,an den Effet vum Glas Homogenisator ass schlecht, awer am Allgemengen kann d'homogenisator Method net d'Degradatiounsphenomen verhënneren.Dofir, wann d'Extraktioun degradéiert ass, sollt den ursprénglechen elektresche Homogenisator fir d'Schleifen mat flëssege Stickstoff benotzt ginn;den urspréngleche Glashomogenisator soll op en elektresche Homogenisator geännert ginn oder direkt mat flëssege Stickstoff gemoolt ginn.De Problem ass bal 100% machbar.geléist kréien.

D'Gëftstoffreschterprobleem, déi spéider Experimenter beaflosst, huet méi divers Ursaachen wéi Verschlechterung, an d'Léisungen sinn entspriechend anescht.Ofschléissend,wann et Degradatioun oder Rescht Gëftstoffer am Tissu ass, muss d'Extraktiounsmethod / Reagens fir dat spezifescht experimentellt Material optimiséiert ginn.Dir musst Är wäertvoll Proben net fir Optimiséierung benotzen: Dir kënnt e puer kleng Déieren wéi Fësch / Poulet vum Maart kafen, de entspriechende Deel vum Material fir d'RNA-Extraktioun huelen, an deen aneren Deel fir d'Protein-Extraktioun - Schleifen mat Mond, Magen an Darm Extrait.

D'Zil-RNA vun der extrahéierter RNA gëtt fir verschidde Suivi-Experimenter benotzt, a seng Qualitéitsufuerderunge sinn ënnerschiddlech

cDNA Bibliothéik Konstruktioun erfuerdert RNA Integritéit ouni Reschter vun Enzymreaktiounsinhibitoren;Northern erfuerdert méi héich RNA Integritéit a méi niddereg Ufuerderunge fir Enzymreaktiounsinhibitoren Reschter;RT-PCR erfuerdert net ze héich RNA Integritéit,awer hemmt Enzymreaktiounen.Rescht Ufuerderunge si strikt.Den Input bestëmmt den Ausgang;all Kéier wann d'Zil ass déi héchst Rengheet RNA ze kréien, wäert et d'Leit a Suen kaschten.

Sammelen / Stockage vun Echantillon

Faktoren déi d'Degradatioun beaflossen Nodeems d'Probe de liewege Kierper verléisst / oder dat ursprénglecht Wuesstumsëmfeld, fänken d'endogen Enzyme an der Probe un d'RNA ze degradéieren,an d'Degradatiounsquote ass mam Inhalt vun endogenen Enzymen an Temperatur verbonnen.Traditionell ginn et nëmmen zwee Weeër fir endogen Enzymaktivitéit komplett ze hemmen: Lysat direkt addéieren a grëndlech a séier homogeniséieren;a kleng Stécker schneiden an direkt a flëssege Stickstoff afréieren.Béid Approche verlaangen séier Operatioun.Déi lescht ass gëeegent fir all Proben, während déi fréier nëmme gëeegent ass fir Tissue mat engem nidderegen Inhalt vun Zellen an endogene Enzymen a méi einfach ze homogeniséieren.Speziell, Planzgewebe, Liewer, Thymus, Bauchspaicheldrüs, Milz, Gehir, Fett, Muskelgewebe, asw.

Fragmentatioun an Homogeniséierung vu Proben

Faktoren déi d'Degradatioun an d'Ausbezuelung beaflossen Sample Fragmentatioun assfir eng grëndlech Homogeniséierung, wat fir eng komplett a komplett Verëffentlechung vu RNA ass.Zellen kënnen direkt homogeniséiert ginn ouni gebrach ze ginn.Tissue kënnen nëmme homogeniséiert ginn nodeems se gebrach sinn.Hef a Bakterien musse mat entspriechend Enzyme gebrach ginn ier se homogeniséiert kënne ginn.Tissue mat engem nidderegen endogenen Enzymgehalt a méi einfacher Homogeniséierung kënnen gläichzäiteg am Lysat vun engem Homogenisator zerquetscht a homogeniséiert ginn;Planzgewebe, Liewer, Thymus, Bauchspaicheldrüs, Milz, Gehir, Fett, Muskelgewebe an aner Proben, Si sinn entweder héich an endogene Enzymen oder sinn net liicht homogeniséiert,sou datt Tissue Stéierungen an Homogeniséierung muss separat gemaach ginn.Déi zouverlässegst a produktivst Method fir Fragmentatioun ass d'Fräsen mat flëssege Stickstoff, an déi zouverlässegst Method vun der Homogeniséierung ass d'Benotzung vun engem elektresche Homogenisator.Eng speziell Notiz iwwer d'Fräsen mat flëssege Stickstoff: d'Probe däerf net während dem ganze Fräsprozess opgedaucht ginn, well endogen Enzyme méi wahrscheinlech funktionnéieren wann se gefruer sinn.

Wiel vun lysate

Afloss op d'Bequemlechkeet vun der Operatioun an d'Faktoren vun de restlechen endogenen Gëftstoffer Déi allgemeng benotzt Lysisléisungen kënne bal d'Aktivitéit vun RNase hemmen.Dofir ass de Schlësselpunkt fir eng Lysisléisung ze wielen a Kombinatioun mat der Reinigungsmethod ze berücksichtegen.Et gëtt eng Ausnam:Proben mat héijen endogenen Enzymgehalt si recommandéiert fir e Lysat ze benotzen deen Phenol enthält fir d'Fäegkeet ze erhéijen fir endogen Enzymen ze inaktivéieren.

Wiel vun der Reinigungsmethod

Faktoren déi Reschtoffall endogene Gëftstoffer beaflossen, Extraktiounsgeschwindegkeet Fir propper Proben wéi Zellen kënnen zefriddestellend Resultater mat bal all Reinigungsmethod kritt ginn.Awer fir vill aner Proben, besonnesch déi mat héijen Niveauen vun Gëftstoffer wéi Planzen, Liewer, Bakterien, asw., ass d'Wiel vun enger passender Reinigungsmethod entscheedend.D'Kolonnzentrifugalreinigungsmethod huet eng séier Extraktiounsgeschwindegkeet a kann effektiv Gëftstoffer ewechhuelen, déi déi spéider enzymatesch Reaktioun vun der RNA beaflossen, awer et ass deier (Foregene kann kosteneffektiv Kits ubidden, méi Detailer klickthei);mat ekonomeschen a klassesche Reinigungsmethoden, wéi LiCl Nidderschlag, kënnen och zefriddestellend Resultater kréien, awer d'Operatiounszäit ass laang..

"Dräi Disziplinen an Aacht Opmierksamkeet" fir RNA Extraktioun

Disziplin 1:En Enn vun der Kontaminatioun vun exogenen Enzymen.

Note 1:Droen strikt Masken a Handschuesch.

Note 2:D'Zentrifugerröhren, Tippkäpp, Pipettestäben, Elektrophoresebehälter an experimentell Bänken, déi am Experiment involvéiert sinn, solle grëndlech entsuergt ginn.

Note 3:D'Reagenser / Léisungen, déi am Experiment involvéiert sinn, besonnesch Waasser, mussen RNase-gratis sinn.

Disziplin 2:Blockéiert d'Aktivitéit vun endogene Enzymen

Note 4:Wielt eng passend Homogeniséierungsmethod.

Note 5:Wielt e passende Lysat.

Note 6:Kontrolléiert de Startbetrag vun der Probe.

Disziplin 3:Kläert Ären Extraktiounszweck

Note 7:Mat all lysate System de Maximum Startbetrag vun Prouf Approche, fällt d'Extraktioun Succès Taux staark.

Note 8:Deen eenzege wirtschaftleche Critère fir erfollegräich RNA Extraktioun ass e Succès an de spéideren Experimenter, net d'Ausbezuelung.

Top 10 Quelle vun RNase Kontaminatioun

1. Fanger sinn déi éischt Quell vun exogenen Enzymen, sou datt Handschuesch musse gedroen an dacks ersat ginn.Zousätzlech mussen och Masken gedroen ginn, well d'Atmung och eng wichteg Enzymquell ass.En zousätzleche Virdeel fir eng Handschuesch Mask ze droen ass den Experimenter ze schützen.

2. Pipette Tipps, Zentrifuge Réier, Pipette - RNase kann net duerch Steriliséierung eleng inaktivéiert ginn, sou datt Pipette Tipps an Zentrifuge Réier mat DEPC behandelt ginn, och wann se als DEPC behandelt markéiert sinn.Et ass am beschten eng speziell Zweck Pipette ze benotzen, wëschen et mat engem 75% Alkohol Koteng Kugel virum Gebrauch, virun allem de Staang;Zousätzlech, ginn sécher net engem Kapp Remover ze benotzen.

3. D'Waasser / Buffer muss fräi vun RNase Kontaminatioun ginn.

4. Op d'mannst soll den Test Dësch propper mat 75% Alkohol Koteng Bäll geläscht ginn.

5.Endogene RNase All Tissue enthalen endogen Enzyme, sou datt séier Gefriess vu Stoffer mat flëssege Stickstoff de beschte Wee ass fir d'Degradatioun ze reduzéieren.Déi flësseg Stickstofflagerung / Schleifmethod ass wierklech onbequem, awer et ass deen eenzege Wee fir Stoffer mat héijen Niveauen vun endogenen Enzymen.

6. RNA Echantillon RNA Extraktioun Produkter kënnen Spure vun RNase Kontaminatioun enthalen.

7. Plasmid Extraktioun Plasmid Extraktioun benotzt dacks Rnase fir RNA ze degradéieren, an de Rescht Rnase soll mat Proteinase K verdaut ginn an duerch PCI extrahéiert ginn.

8. RNA Lagerung Och wann et bei niddreger Temperatur gespäichert ass, verursaache Spuermengen vun RNase RNA-Degradatioun.Déi bescht Léisung fir laangfristeg Erhaalung vu RNA ass eng Salz/Alkoholsuspension, well Alkohol all enzymatesch Aktivitéit bei niddregen Temperaturen hemmt.

9. Wann d'Katione (Ca, Mg) dës Ionen enthalen, gëtt d'Erhëtzung vun 80C fir 5 Minutten verursaacht datt d'RNA gespléckt gëtt, also wann d'RNA erhëtzt muss, muss d'Konservéierungsléisung e chelatéierende Agent enthalen (1mM Natriumcitrat, pH 6,4).

10. Enzymen, déi an de spéideren Experimenter benotzt ginn, kënnen duerch RNase kontaminéiert ginn.

10 Tipps fir RNA Extraktioun

1: Schnell verhënneren RNase Aktivitéit.Echantillon gi séier no der Sammlung gefruer, an RNase gëtt duerch séier Operatioun während der Lysis inaktivéiert.

2: Wielt eng adequat Extraktiounsmethod fir Tissue mat héije Ribozymgehalt, an Fettgewebe ass am beschten d'Method ze benotzen déi Phenol enthält.

3: Prognosequalitéit erfuerdert Norden, cDNA-Bibliothéikkonstruktioun erfuerdert héich Integritéit, an RT-PCR an RPA (Ribonuclease Protection Assay) erfuerderen keng héich Integritéit.RT-PCR erfuerdert héich Rengheet (Enzyminhibitorreschter).

4: Eng grëndlech Homogeniséierung ass de Schlëssel fir d'Ausbezuelung ze verbesseren an d'Degradatioun ze reduzéieren.

5: Kontrolléiert d'Integritéit vun der RNA Elektrophorese Detektioun, 28S: 18S = 2: 1 ass e komplett Zeechen, 1: 1 ass och akzeptabel fir déi meescht Experimenter.

6: Entfernung vun DNA fir RT-PCR, Array Analyse Et ass am beschten Dnase I ze benotzen fir DNA ze läschen.

7: Reduzéiert d'Kontaminatioun vun exogenen Enzymen - Enzyme kënnen net vu baussen importéiert ginn.

8: Wann Dir niddereg-Konzentratioun Nukleinsäure konzentréiert, soll e Co-Nidderschlagsreagens dobäi ginn.Awer fir de Co-precipitant mat Enzymen an DNA Kontaminatioun ze vermeiden.

9: D'RNA grëndlech opléisen, wann néideg, 5 Minutten op 65C erhëtzen.

gëeegent Stockage Method

Et kann bei -20C fir eng kuerz Zäit gespäichert ginn, a bei -80C fir eng laang Zäit.Den éischte Schrëtt fir d'RNA Ausbezuelen ze verbesseren ass ze realiséieren datt den RNA Inhalt vu verschiddene Proben immens variéiert.Héich Heefegkeet (2-4 ug/mg) wéi Liewer, Bauchspaicheldrüs, Häerz, mëttel Heefegkeet (0,05-2 ug/mg) wéi Gehir, Embryo, Nier, Lunge, Thymus, Eierstock, geréng Heefegkeet (<0,05 ug/mg) mg) wéi Blase, Schanken, Fett.

1: Lyse Zellen fir RN ze befreien - wann RNA net fräigelooss gëtt, gëtt d'Ausbezuelung reduzéiert.Elektresch Homogeniséierung funktionnéiert besser wéi aner Homogeniséierungsmethoden, awer muss vläicht och mat anere Methoden kombinéiert ginn, sou wéi flësseg Stickstoffmashing, enzymatesch Verdauung (Lysozym/Lyticase)

2: Optimisatioun vun der Extraktiounsmethod.Déi gréisste Problemer mat Phenol-baséiert Methoden sinn onkomplett Stratifikatioun an deelweis RNA Verloscht (de Supernatant kann net komplett ewechgeholl ginn).Onkomplett Stratifikatioun ass wéinst héijen Nukleinsäure a Proteingehalt, wat geléist ka ginn andeems d'Quantitéit vum benotzte Lysat erhéicht gëtt oder d'Quantitéit u Probe reduzéiert.E Schrëtt vun der Chloroform Extraktioun gouf zum Fettgewebe bäigefüügt.RNA Verloscht kann reduzéiert ginn duerch Réckpumpen oder andeems d'organesch Schicht ewechgeholl gëtt, gefollegt vun Zentrifugéierung.De gréisste Problem mat Kolonnen centrifugation-baséiert Methoden ass iwwerschësseg Prouf.

Klassesch Extraktioun Tipps

1. Phenol Reinigung: Füügt e gläiche Volume vun 1: 1 Phenol / Chloroform a mëschen 1-2 Minutten kräfteg.Zentrifuge bei héijer Geschwindegkeet fir 2 Minutten.Den Supernatant virsiichteg ewechhuelen (80-90%).Gitt ni an d'Mëttschicht.E gläiche Volume vun der Reaktiounsléisung kann op Phenol / Chloroform bäigefüügt ginn an de Supernatant ewechgeholl ginn.Déi zwee Supernatanten kënnen zesumme gemëscht ginn fir Nukleinsäure Nidderschlag fir d'Ausbezuelung ze verbesseren.Sidd net ze sanft beim Vermëschen, a probéiert net all Supernatant ze läschen.

2. Wäschen mat 70-80% Ethanol: Wärend der Wäschung muss d'Nukleinsäure suspendéiert ginn, fir datt de Reschtsalz ewechgewäsch gëtt.Zur selwechter Zäit, direkt nodeems d'Ethanol ofgeschaaft gouf, centrifugéiert mat héijer Geschwindegkeet fir e puer Sekonnen, a läscht dann de Rescht Ethanol mat enger Pipette.Opléisen nodeems se bei Raumtemperatur fir 5-10 Minutten stoe loossen.

11. Extraktioun vu speziellen Organisatiounen

1. Fibrous Tissu: De Schlëssel fir d'RNA Extraktioun aus fibrous Tissue wéi Häerz / Skelettmuskel ass den Tissu komplett ze stéieren.Dës Stoffer hunn eng niddreg Zelldicht, sou datt d'Quantitéit vun der RNA pro Eenheet Gewiicht vum Tissu niddereg ass, an et ass am beschten sou vill Startbetrag wéi méiglech ze benotzen.Vergewëssert Iech den Tissu grëndlech ënner Gefrierbedéngungen ze schleifen.

2. Tissue mat héije Protein / Fettgehalt: Gehir / Geméis Fettgehalt ass héich.No PCI Extraktioun enthält de Supernatant wäiss Flocculen.De Supernatant muss erëm mat Chloroform extrahéiert ginn.

3. Tissue mat héijen Nukleinsäure / Ribozyme Inhalt: d'Milz / Thymus huet héich Nukleinsäure a Ribozyme Inhalt.Schleifen Tissu ënner Gefrierbedéngungen gefollegt vu séierer Homogeniséierung kann effektiv Ribozyme inaktivéieren.Wann de Lysat awer ze viskos ass (wéinst héije Nukleinsäuregehalt), kann d'PCI-Extraktioun net effektiv stratifizéiert ginn;méi lysate derbäi kann dëst Thema léisen.Multiple PCI Extraktioune kënne méi Rescht DNA ewechhuelen.Wann e wäisse Nidderschlag direkt nom Alkohol bäigefüügt gëtt, beweist et op DNA Kontaminatioun.Re-Extraktioun mat sauerem PCI no Opléisung kann DNA Kontaminatioun ewechhuelen.

4. Planz Tissu: Planz Tissu ass méi komplex wéi Déier Tissu.Allgemeng gi Planzen ënner flëssege Stickstoffbedéngungen gemoolt, sou datt RNA-Degradatioun duerch endogene Enzymen ongewéinlech ass.Wann den Degradatiounsproblem net geléist gëtt, ass et bal sécher duerch Gëftstoffer, déi an der Probe enthale sinn, verursaacht.D'Gëftstoffer, déi a ville Planzen enthale sinn, féieren zu Reschter, an de Grond fir Reschter ass dacks well dës Gëftstoffer e puer Ähnlechkeeten mat RNA hunn: Dir fällt aus an ech fällt aus, an Dir adsorbéiert an ech adsorbéiert.Dës Charakteristike bestëmmen datt si ganz staark Enzyminhibitoren sinn.

Am Moment kënne kommerziell RNA Extraktiounsreagenzë fir bal all Déiergewebe mat klengen Upassungen ugepasst ginn, awer et gi wéineg kommerziell RNA Extraktiounsreagenz, déi fir déi meescht Planzgewebe gëeegent sinn.Glécklecherweis kann Foregene speziell biddenPlanzen RNA Extraktioun Kits, mir hunnPlant Total RNA Isolatioun Kit, Plant Total RNA Isolation Kit Plus.Déi lescht ass speziell fir Planzen mat héijer Polysaccharid- a Polyphenolgehalt entwéckelt.Fir RNA Extraktioun ass de Feedback vu Labo Benotzer besonnesch gutt.

12. D'Effekt vun der Prouf Gefriess an thawing D'gefruer Prouf kann méi grouss ginn, an et muss geschnidde ginn ier se fir RNA Extraktioun benotzt.Proben tendéieren ze schmëlzen (méiglecherweis deelweis) beim Ausschneiden.Gefruerene Proben musse vläicht virum RNA Extraktioun gewien ginn, an d'Verdauung wäert definitiv während dësem Prozess optrieden.Heiansdo trëfft d'Verdauung vun der Probe och während dem flëssege Stickstofffräsprozess op;oder de gefruerene Probe gëtt direkt an d'Lysat bäigefüügt ouni flësseg Stickstoffmillen, an d'Verdauung wäert definitiv virun der kompletter Homogeniséierung geschéien.Experimenter hu gewisen datt gefruerene Tissue méi ufälleg ass fir RNA-Degradatioun beim Opdecken wéi frësch Tissu.De wahrscheinleche Grond: De Gefrier-Tau-Prozess stéiert Strukturen an der Zell, sou datt et méi einfach gëtt fir endogene Enzymen an direkten Kontakt mat der RNA ze kommen.

13. Uerteel vun der RNA Qualitéit Normalerweis gëtt Elektrophorese benotzt fir d'Integritéit vun der RNA ze beurteelen, an A260 / A280 gëtt benotzt fir d'Rengheet vun der RNA ze beurteelen.An der Theorie huet intakt RNA e Verhältnis vun 28S:18S = 2,7:1, an déi meescht Daten ënnersträichen d'Verhältnis vun 28S:18S = 2:1.D'Tatsaach ass datt bal keng vun der RNA extrahéiert aus Proben ausser Zellen an engem 2: 1 Verhältnis ass (dëst gouf mam Agilent Bioanalyzer kritt).

D'Elektrophoreseresultater vun RNA si vu ville Faktoren beaflosst, dorënner sekundär Struktur, Elektrophoresebedéngungen, Probelast, Sättigungsgrad duerch EB, etc.. Benotzt gebierteg Elektrophorese fir RNA z'entdecken an DNA Marker als Kontroll ze benotzen.Wann d'28S bei 2kb an den 18S bei 0.9kb kloer sinn, an 28S: 18S> 1, kann d'Integritéit den Ufuerderunge vun de meeschte spéider Experimenter erfëllen.

A260 / A280 ass en Indikator dee vill Duercherneen verursaacht huet.Éischt vun all, ass et néideg der ursprénglecher Bedeitung vun dëser Luucht fir Nukleinsäuren ze klären: reng RNA, seng A260/280 = ongeféier 2,0.Pure RNA ass d'Ursaach an A260/A280 = 2 ass den 'Effekt'.Elo benotzt jiddereen A260 / A280 als 'Ursaach', denkt datt "wann A260 / A280 = 2, dann ass RNA pur", wat natierlech zu Duercherneen féiert.

Wann Dir interesséiert sidd, kënnt Dir e klenge Reagens addéieren deen dacks an der Extraktioun benotzt gëtt, wéi Phenol, Guanidin Isothiocyanat, PEG, etc., op Är RNA Probe, an dann den A260/A280 Verhältnis moossen.D'Realitéit ass datt vill vun de Reagenzë fir d'RNA Extraktioun benotzt ginn, souwéi vill Gëftstoffer an der Probe, ongeféier A260 an A280 absorbéieren, wat A260 / A280 beaflosst.

Déi léierräichst Approche am Moment ass RNA Proben am 200-300 nm Beräich ze scannen.D'Kurve vu pure RNA huet déi folgend Charakteristiken: d'Kurve ass glat, A230 an A260 sinn zwee Inflektiounspunkte, A300 ass no bei 0, A260 / A280 = ongeféier 2.0, an A260 / A230 = ongeféier 2.0.Wann d'Scandaten net verfügbar sinn, muss den A260/A230 Verhältnis och bestëmmt ginn, well dëst Verhältnis méi empfindlech ass fir d'Iwwerdroung vun all Gëftstoffer, déi d'enzymatesch Reaktioun beaflossen.Bedenkt d'linear Gamme vum Apparat (0,1-0,5 fir A260).

Et ginn zwee aner nëtzlech Phänomener: de Verhältnis wäert ongeféier 0,3 méi niddereg sinn wann A260/A280 am Waasser gemooss gëtt;wärend de Verhältnis gemooss an 10 mM EDTA ongeféier 0,2 méi héich ass wéi dee gemooss an 1 mM EDTA.

Zesummenhang Produkter:

China Plant Total RNA Isolatioun Kit Fabrikant an Fournisseur |Foregene (foreivd.com)

RNA Isolatioun Serie Fournisseuren a Factory |China RNA Isolatioun Serie Hiersteller (foreivd.com)

RNA Isolatioun Serie - Foregene Co., Ltd. (foreivd.com)