(96-Well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit - SYBR Green I
Beschreiwunge
Déi(96-well) QuickEasyTM Zell Direct RT-qPCR Kit-SYBR Gréng Ibitten eenzegaartegen Lysisbuffersystemto séier RNA fräiginnaus kultivéierten ZellEchantillon fir RT-qPCR Reaktioune, eliminéiert der Zäit-opwänneg an ustrengendRNA Reinigungsprozess, an dauert just 7 Minutten fir déi erfuerderlech RNA Schabloun ze kréien.Déi5 × Direkter RT Mixan2× Direkter qPCR Mix-SYBRan der Këscht virgesinn ka séier aneffektiv Echtzäit quantitativ kréienPCR Resultater.
5 × Direct RT Mix an 2 × Direct qPCR Mix-SYBR hunn eng staark Inhibitor Toleranz, a kënnen d'Lysat vun der Probe benotze fir als Schabloun fir effizient ëmgedréint Transkriptioun a spezifesch Amplifikatioun ze testen.De Reagens enthält Foregene eenzegaarteg Reverse Transkriptase mat héijer Affinitéit fir RNA, souwéi Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , Reaktiounsbuffer, PCR Optimisator a Stabilisator, a kann a Verbindung mam Lysis-Puffer benotzt ginn fir d'Probe séier, einfach a präzis z'entdecken, an et huet d'Charakteristike vu héijer Empfindlechkeet, staarker Spezifizitéit a gudder Stabilitéit.
De Kit ass op Mikro-System Lysis vun 96-gutt cultured Zellen riicht, an huet gutt Uniformitéit a Konsequenz;de Kit Komponente déi 96 lysis Reaktioune, 96 ëmgedréint Transkriptiouns Reaktioune an 96 × 2 qPCR Reaktioune, déi de 96-Well Zellen Plack fir eent-Zäit benotzen treffen kann, d'Verschmotzung duerch widderholl Ouverture, Afréiere an thawing vun reagents an der Degradatioun vun reagent Leeschtung vermeiden.
Kit Komponente
| Kit Zesummesetzung ( 50 μL lysis System/20 μlRT Reaktiounssystem /20μL qPCR Reaktioun System) | DRT-03011 | Remarque | |
| 96t | |||
| DeelI | BufferCL | 5ml vun | ZellLysis |
| VirdrunProtease Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Deel II | DNAEraser | 100 μL | |
| 5 × Direkter RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2 × Direkter qPCR Mix-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX Referenz Dye | 400µL | ||
| RNase- fräiddH2 O | 1,7ml |
| |
| Mjährlech | 1 Stéck | 1 Portioun | |
*: De Lysis Reagens DNA Eraser ass am Deel II vum Kit abegraff;Zell Lysis, RT, a qPCR Komponente kënnen separat kaaft ginn.
Fonctiounen & Virdeeler
■Einfach an effektiv: mat Cell Direct RT Technologie kënnen RNA Proben a just 7 Minutten kritt ginn.
■ D'Probe Nofro ass kleng, sou niddereg wéi 10 Zellen kënnen getest ginn.
■ Héich Débit: et kann séier RNA an Zellen entdecken an 384, 96, 24, 12, 6-Well Platen.
■ DNA Eraser ka séier verëffentlecht Genomen erofhuelen, den Impakt op spéider experimentell Resultater staark reduzéieren.
■ Optimiséiert RT- a qPCR-System mécht déi zwee-Schrëtt RT-PCR ëmgedréint Transkriptioun méi effizient a PCR méi spezifesch, a méi resistent géint RT-qPCR Reaktiounsinhibitoren.
Kit Applikatioun
Ëmfang vun der Applikatioun: kultivéiert Zellen.
- RNA verëffentlecht duerch Probelysis: nëmmen applicabel fir d'RT-qPCR Schabloun vun dësem Kit.
- De Kit kann fir déi folgend Zwecker benotzt ginn: Genausdrock Analyse, Verifizéierung vum siRNA-mediéierten Gen Silencing Effekt, Drogenscreening, etc.
Stockage an Regal Liewen
Deel I vun dësem Kit soll um 4 gespäichert ginn℃;Deel II soll bei -20 ℃ gespäichert ginn.
Foregene Protease Plus II soll um 4 gespäichert ginn℃, afréiere net bei -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-Taqman soll bei -20 gespäichert ginn℃am Däischteren;wann dacks benotzt, kann et och um 4 gespäichert ginn℃ fir kuerzfristeg Lagerung (notzt bannent 10 Deeg).
Real Time PCR Primer Design Prinzipien
Forward Primer a Reverse Primer
Fir Real Time PCR ass Primer Design ganz wichteg.Primer si mat der Spezifizitéit an der Effizienz vun der PCR Amplifikatioun verbonnen, a kënne mat Referenz op déi folgend Prinzipien entworf ginn:
- Primer Längt: 18-30bp.
- GC Inhalt: 40-60%.
- Tm Wäert: Primer Design Software, wéi Primer 5, kann den Tm Wäert vum Primer ginn.D'Tm Wäerter vun den Upstream an Downstream Primer solle sou no wéi méiglech sinn.D'Tm Berechnungsformel kann och benotzt ginn: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Wann Dir PCR ausféiert, gëtt eng Temperatur ënner dem Primer Tm Wäert vu 5 ° C allgemeng als d'Annealtemperatur ausgewielt (déi entspriechend Erhéijung vun der annealing Temperatur kann d'Spezifizitéit vun der PCR Reaktioun erhéijen).
- Primer a PCR Produkter:
- Design Primer PCR Amplifikatioun Produktlängt ass am léifsten 100-150bp.
- Designprimer am sekundäre strukturelle Gebitt vun der Schabloun solle sou vill wéi méiglech vermeit ginn.
- Vermeit d'Bildung vun 2 oder méi komplementäre Basen tëscht den 3' Enden vun Upstream an Downstream Primer.
- Primer 3′ Terminal Basis kann net mat 3 zousätzlech konsekutiv G oder C präsent sinn.
- D'Primer selwer kënnen net komplementär Strukturen hunn, soss gëtt eng Haarnadelstruktur geformt, déi PCR Amplifikatioun beaflosst.
- ATCG soll sou gläichméisseg wéi méiglech an der Primer Sequenz verdeelt ginn, an d'3′ Terminal Basis soll als T vermeit ginn.
Anhang1: cell direktRT-qPCR Kit Komponentet Zousaz Pak
1.Zell Lysis Léisung
| Zell Lysis Léisung | |||
| Kit Komponente (24-Well Lysis System / Well) | DRT-01011-A1 Fotoen | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Deelech | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 l | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DeelII | DNA Eraser | 400 l | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Kit Komponente (20 μl Reaktiounssystem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Direkter RT Mix | 8 00l |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Kit Komponente (20 μl Reaktiounssystem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2 × Direkter qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × ROX Referenz Dye | 40 l vun | 200 l |
| RNase-Free ddH2O | 1,7ml | 10 ml |
Bedienungsanleitung:
