Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready One-Step qRT-PCR Kits
Beschreiwunge
Dëse Kit benotzt en eenzegaartege Lysis-Puffersystem, dee séier RNA aus kultivéierten Zellproben fir RT-qPCR Reaktiounen fräigeloosse kann, an doduerch den Zäitopwendende an ustrengenden RNA-Reinigungsprozess eliminéiert.D'RNA Template kann a just 7 Minutten kritt ginn.Déi 5×Direkt RT Mix an 2×Direkte qPCR Mix-SYBR Reagens, déi vum Kit geliwwert ginn, kënne séier an effektiv Echtzäit quantitativ PCR Resultater kréien.
5×Direkt RT Mix an 2×Direkt qPCR Mix-SYBR hu staark inhibitor Toleranz, an der lysate vun de Echantillon kann als Schabloun fir RT-qPCR direkt benotzt ginn.Dëse Kit enthält déi eenzegaarteg RNA héich Affinitéit Foregene ëmgedréint Transkriptase, an Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaktiounsbuffer, PCR Optimisator a Stabilisator.
Spezifikatioune
200×20μl Rxns, 1000×20μl rxns
Kit Komponente
| Deel I | Buffer CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Deel II | DNA Eraser |
| 5 × Direkter RT Mix | |
| 2× Direkter qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × ROX Referenz Dye | |
| RNase-Free ddH2O | |
| Uweisungen | |
Fonctiounen & Virdeeler
■Einfach an effektiv: mat Cell Direct RT Technologie kënnen RNA Proben a just 7 Minutten kritt ginn.
■ D'Probe Nofro ass kleng, sou niddereg wéi 10 Zellen kënnen getest ginn.
■ Héich Débit: et kann séier RNA an Zellen entdecken an 384, 96, 24, 12, 6-Well Platen.
■ DNA Eraser ka séier verëffentlecht Genomen erofhuelen, den Impakt op spéider experimentell Resultater staark reduzéieren.
■ Optimiséiert RT- a qPCR-System mécht déi zwee-Schrëtt RT-PCR ëmgedréint Transkriptioun méi effizient a PCR méi spezifesch, a méi resistent géint RT-qPCR Reaktiounsinhibitoren.
Kit Applikatioun
Ëmfang vun der Applikatioun: kultivéiert Zellen.
- RNA verëffentlecht duerch Probelysis: nëmmen applicabel fir d'RT-qPCR Schabloun vun dësem Kit.
- De Kit kann fir déi folgend Zwecker benotzt ginn: Genausdrock Analyse, Verifizéierung vum siRNA-mediéierten Gen Silencing Effekt, Drogenscreening, etc.
Diagramm
Stockage an Regal Liewen
Deel I vun dësem Kit soll bei 4 ℃ gespäichert ginn;Deel II soll bei -20 ℃ gespäichert ginn.
Foregene Protease Plus II soll um 4 gespäichert ginn℃, afréiere net bei -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-SYBR soll bei -20 gespäichert ginn℃am Däischteren;wann dacks benotzt, kann et och um 4 gespäichert ginn℃ fir kuerzfristeg Lagerung (notzt bannent 10 Deeg).
Real Time PCR Primer Design Prinzipien
Forward Primer a Reverse Primer
Fir Real Time PCR ass Primer Design ganz wichteg.Primer si mat der Spezifizitéit an der Effizienz vun der PCR Amplifikatioun verbonnen, a kënne mat Referenz op déi folgend Prinzipien entworf ginn:
Primer Längt: 18-30bp.
GC Inhalt: 40-60%.
Tm Wäert: Primer Design Software, wéi Primer 5, kann den Tm Wäert vum Primer ginn.D'Tm Wäerter vun den Upstream an Downstream Primer solle sou no wéi méiglech sinn.D'Tm Berechnungsformel kann och benotzt ginn: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Wann Dir PCR ausféiert, gëtt eng Temperatur ënner dem Primer Tm Wäert vu 5 ° C allgemeng als d'Annealtemperatur ausgewielt (déi entspriechend Erhéijung vun der annealing Temperatur kann d'Spezifizitéit vun der PCR Reaktioun erhéijen).
Primer a PCR Produkter:
Design Primer PCR Amplifikatioun Produktlängt ass am léifsten 100-150bp.
Designprimer am sekundäre strukturelle Gebitt vun der Schabloun solle sou vill wéi méiglech vermeit ginn.
Vermeit d'Bildung vun 2 oder méi komplementäre Basen tëscht den 3' Enden vun Upstream an Downstream Primer.
Primer 3′ Terminal Basis kann net mat 3 zousätzlech konsekutiv G oder C präsent sinn.
D'Primer selwer kënnen net komplementär Strukturen hunn, soss gëtt eng Haarnadelstruktur geformt, déi PCR Amplifikatioun beaflosst.
ATCG soll sou gläichméisseg wéi méiglech an der Primer Sequenz verdeelt ginn, an d'3′ Terminal Basis soll als T vermeit ginn.
Anhang 1: Zell Direct RT-qPCR Kit Komponent Zousaz Pak
1.Zell Lysis Léisung
|
| |||
| Kit Komponente (24-Well Lysis System / Well) | DRT-01011-A1 Fotoen | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Deelech | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 l | 1 ml × 2 | |
| Buffer ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| DeelII | DNA Eraser | 400 l | 1 ml × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Kit Komponente (20 μl Reaktiounssystem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Direkter RT Mix | 8 00l |
| RNase-Free ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Kit Komponente (20 μl Reaktiounssystem) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direkter qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50 × ROX Referenz Dye | 40 l vun | 200 l |
| RNase-Free ddH2O | 1,7ml | 10 ml |
Bedienungsanleitung:
