Escherichia Coli O157: H7 Nucleic Acid Detection Kit (PCR Fluorescent Probe Method/Lyophilization)
Kit Beschreiwung:
Cat.Nr.FP 103
Et gëtt benotzt fir séier Detektioun a Screening vun E. coli O157: H7 a Liewensmëttel, Fudder, Waasserproben an Ëmweltproben.
Beschreiwunge
Et gëtt benotzt firséier Detektioun a Screening vun E. coli O157: H7 a Liewensmëttel, Fudder, Waasserproben an Ëmweltproben.
[Testprinzip]
Geméiss dem Prinzip vun der fluoreszenter PCR-Technologie sinn spezifesch Primer an Taqman-Sonden fir de spezifesche Gen vun Escherichia coli O157: H7 entworf, an duerch e fluoreszent PCR-Instrument festgestallt, fir d'Detektioun vun Escherichia coli O157: H7 Qualitativ Detektioun vun DNA ze realiséieren.
Kit Inhalt
Notiz: ROX Kanal Sonde ass net abegraff.
| CKomponente | Spezifizéierung | QUnitéit |
| Buffer A | Tube | 1 |
| Buffer B | Tube | 1 |
| Positiv Kontroll | Tube | 1 |
| Negativ Kontroll | Tube | 1 |
Erwaart Benotzung
Et gëtt benotzt fir séier Detektioun a Screening vun E. coli O157: H7 a Liewensmëttel, Fudder, Waasserproben an Ëmweltproben.
Stockage Konditiounen an Verfallsdatum
Store bei -20 ℃ am Däischteren a vermeit widderholl Afréiere an Opdecken.
D'Validitéit Period ass den 12Méint, an de Produktiounsdatum gëtt op der äusserer Verpackung ugewisen.
Instrumenter a Verbrauchsmaterial
Fluoreszent quantitativ PCR Instrument, Pipette Pistoul a passende Tipps, Wirbelshaker, Mini Zentrifuge.
Benotzung
1. Probe Veraarbechtung
1.1 Probetyp: Dëse Kit ass gëeegent fir Liewensmëttel, Fudder, Waasserproben an aner Proben, déi verdächtegt sinn duerch Escherichia coli O157:H7 kontaminéiert ze sinn.Fir déif veraarbecht Fleeschprodukter, Gedrénks an aner Substanzen déi Pigmenter enthalen, musse se gespullt ginn fir d'Fluoreszenz Signalsammlung ze vermeiden.
1.2 Probeveraarbechtung: Referéiert op "GB 4789.10-2016 Food Safety National Standard Food Microbiological Examination of Escherichia coli O157: H7 Test" fir Probepräparatioun, Beräicherungskultur an Isolatioun vun Escherichia coli O157: H7.
- NUcleinsäure Extraktioun
Huelt 20 ml Beräicherungsléisung an engem 1,5 ml Zentrifugefühl, füügt 200 μL mikrobiellen Lysat derbäi (zousätzlech Kit ass erfuerderlech), vortex fir 30 Sekonnen, centrifugéiert kuerz a setzt op d'Säit.
Bemierkungen: D'Extraktioun vun Nukleinsäure aus dem Lysat soll bannent 10 Minutten ofgeschloss ginn, a kann net laang gespäichert ginn.
3. Nukleinsäure Amplifikatioun
3.1 Aktivéiert de fluoreszent quantitativen PCR-Instrument fir ze benotzen.
Buffer A a Buffer B aus dem Kit, schmëlzen se grëndlech, a centrifugéiert kuerz.Füügt 18 μL Buffer A an 2 μL Buffer B an all PCR Reaktiounsröhre.Füügt dann 5 ml vun all negativ Kontroll, extrahéiert Nukleinsäure a positiv Kontroll an PCR-Reaktiounsröhre, deckt d'Röhre a centrifugéiert kuerz.
3.3 Transfert de PCR Reaktiounsröhre op eng fluoreszent PCR Maschinn, a benotzt déi folgend Prozeduren fir Amplifikatiounsexperimenter auszeféieren: wielt 25 ml fir de Reaktiounssystem, sammelt Fluoreszenz Signaler bei 60 ° C fir all Zyklus, a wielt FAM fir den Detektiounskanal.
| Schrëtt | Programm | Zuel vun Zyklen |
| 1 | 37℃ 5 min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60℃ 30s (Fluoreszenz sammelen) |
Guiden fir Problemer Analyse
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Keen RNA kann extrahéiert ginn oder d'Ausbezuele vun Nukleinsäure ass niddereg
Et gi meeschtens vill Faktoren déi d'Erhuelungseffizienz beaflossen, sou wéi: Probe RNA Inhalt, Operatiounsmethod, Elutiounsvolumen, etc..
Analyse vun allgemeng Ursaachen:
1.Eisbad oder Tieftemperatur (4 ° C) Zentrifugéierung während der Operatioun.
Virschlag: Raumtemperatur (15-25 ° C) Operatioun, ni Äisbad an niddreg Temperatur Zentrifuge.
2. Ongerecht Prouflagerung oder Probelagerung fir ze laang.
Virschlag: Echantillon bei -80 ° C gespäichert oder a flëssege Stickstoff afréieren, a vermeit widderholl Gefrier-Thaw benotzen;probéiert frësch gesammelt Proben fir RNA Extraktioun ze benotzen.
3.Insufficient Prouf Lysis
Recommandatioun: Gitt sécher datt d'Probe an d'Aarbechtsléisung (Linear Acrylamid) grëndlech gemëscht an 10 min bei Raumtemperatur (15-25 ° C) inkubéiert sinn.
4.Den Eluent gouf falsch bäigefüügt
Empfehlung: Vergewëssert Iech datt RNase-Free ddH2O an d'Mëtt vun der Membran vun der Reinigungskolonne bäigefüügt gëtt
5.Improper Volume vun anhydrous Ethanol am Buffer viRW2
Suggestioun: Follegt w.e.g. d'Instruktioune, füügt de richtege Volumen vun waasserdichtem Ethanol un de Buffer viRW2 a mëscht se gutt ier Dir de Kit benotzt.
6.Improper Probe Benotzung.
Virschlag: 200μl Prouf pro 500μl Buffer viRL.Exzessiv Probevolumen wäert zu enger reduzéierter RNA Extraktiounsquote féieren.
7.Improper elution Volume oder onkomplett elution.
Virschlag: D'Eluentvolumen vun der Reinigungskolonne ass 30-50μl;wann den Elutiounseffekt net zefriddestellend ass, ass et recommandéiert virgehëtzt RNase-Free ddH ze addéieren2O a verlängeren d'Zäit Plaz bei Raumtemperatur, wéi 5-10min
8.Purification Kolonn huet Ethanol Reschter no Spülen am Buffer viRW2.
Suggestioun: Wann Ethanol nach ëmmer nach Spülen am Buffer viRW2 an eidel Rouer Zentrifugatioun fir 2min bleift, kann d'Reinigungskolonne bei Raumtemperatur fir 5min no eidel-Röhre-Zentrifugerung verlooss ginn fir de Rescht Ethanol komplett ze läschen.
D'Degradatioun vu gereinegt RNA Moleküle
D'Qualitéit vun der gereinegt RNA ass verbonne mat Faktoren wéi Probelagerung, RNase Kontaminatioun, an Operatioun.
Analyse vun allgemeng Ursaachen:
1.Déi gesammelt Proben goufen net an der Zäit gespäichert.
Virschlag: Wann d'Probe net an der Zäit no der Sammlung benotzt gëtt, späichere se w.e.g. bei -80 ℃ oder flëssege Stickstoff direkt.Fir d'Extraktioun vun RNA Molekülle, probéiert frësch gesammelt Proben ze benotzen wann ëmmer méiglech.
2. Gesammelte Proben goufen ëmmer erëm gefruer an opgedaucht.
Virschlag: Vermeiden widderholl Afréiere an thawing (net méi wéi eemol) während Prouf Sammelstécker a Stockage, soss wäert d'Ausbezuelen vun Nukleinsäure erofgoen.
3.RNase gouf am Operatiounsraum agefouert oder keng Wegwerfhandschuesch, Masken, asw.
Virschlag: D'Extraktioun vun RNA Moleküle Experiment ass am beschten an engem separaten RNA Operatiounsraum ausgefouert, an den experimentellen Dësch gëtt virum Experiment gebotzt.Drot disposéierbar Handschuesch a Masken wärend dem Experiment fir RNA Degradatioun verursaacht duerch RNase Aféierung ze vermeiden.
4.De Reagens ass kontaminéiert vu RNase während der Benotzung.
Virschlag: Ersetzen mat neie Viral RNA Isolatioun Kit fir ähnlech Experimenter.
5.D'RNase Kontaminatioun vun den Zentrifuge Röhren, Pipette Tipps, asw Suggestioun: Vergewëssert Iech datt d'Zentrifugerröhren, Pipette Tipps a Pipette all RNase-Free sinn.
Déi gereinegt RNA Moleküle beaflosst downstream Experimenter
D'RNA Molekülle gereinegt vun der Reinigungskolonne beaflossen Downstream Experimenter wann et ze vill Salzionen oder Proteine gëtt, sou wéi: ëmgedréint Transkriptioun, Northern Blot, etc..
1.Et gi verbleiwen Salzionen an den eluéierten RNA-Moleküle.
Recommandatioun: Vergewëssert Iech datt de richtege Volumen vun anhydrous Ethanol zu Buffer viRW2 bäigefüügt gouf, a wäscht d'Rengungskolonne zweemol no der korrekter Zentrifugerungsgeschwindegkeet op der Betriebsinstruktioun; Wann et nach ëmmer Salzione bleiwen, kënnt Dir Buffer viRW2 an d'Rengungskolonne addéieren, a lass et bei Raumtemperatur fir 5min.Fuert dann d'Zentrifugerung fir d'Salzionkontaminatioun am gréissten Ausmooss ze läschen
2.Et bleiwen Ethanol an den eluéierten RNA-Moleküle
Virschlag: eemol bestätegt datt d'Preinungssäulen duerch Buffer viRW2 gespullt goufen, fuert eidel Tube-Zentrifugerung no der Zentrifugalgeschwindegkeet op den Operatiounsinstruktiounen.Wann et nach ëmmer Ethanol bleift, kann et 5 Minutte bei Raumtemperatur no enger eidel Rouer Zentrifugerung verlooss ginn fir de Rescht Ethanol am gréissten Ausmooss ze läschen.
Bedienungsanleitung:
Viral RNA Isolation Kit Bedienungsanleitung
