Problem Analyse Guide

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Niddereg Ausbezuele oder keng DNA

Et gi meeschtens vill Faktoren, déi d'Ausbezuele vun der genomescher DNA beaflossen, dorënner d'Quell vun der Probe, den Alter vun der Probe, d'Späicherbedéngungen vun der Probe an d'Operatioun.

Genomesch DNA konnt net während der Extraktioun kritt ginn

1. D'Gewëssproben ginn ongerecht gespäichert oder ze laang gespäichert, wat zu der Degradatioun vun der genomesch DNA resultéiert.

Recommandatioun: Späichert Tissueproben a flëssege Stickstoff oder -20°C;probéiert nei gesammelt Proben fir genomesch DNA Extraktioun ze benotzen.

2. Ze wéineg Probe Betrag kann dozou féieren datt déi entspriechend genomesch DNA net extrahéiert gëtt.

Virschlag: Fir Tissueproben déi laang Zäit gespäichert goufen oder eng schwéier genomesch DNA Degradatioun hunn, kann d'Quantitéit un Tissueproben entspriechend erhéicht ginn fir bedeitend genomesch DNA ze extrahieren.De Betrag vun der Probe kann no den DNA Bedierfnesser bestëmmt ginn, awer déi frësch Probe däerf net méi wéi 100mg sinn, an déi trocken Probe däerf net méi wéi 30mg sinn.

3. D'Probe gëtt net mat flëssege Stickstoff gemoolt oder ze laang no flëssege Stickstoff plazéiert.

Virschlag: Wärend der DNA-Extraktioun muss d'Probe voll mat flëssege Stickstoff gemoolt ginn fir d'Zellmauer ze briechen;nom Schleifen, transferéiert w.e.g. de Probepulver op PL1 virgehëtzt op 65°C sou séier wéi méiglech (wann de Buedempudder geschmollt ass, fänkt d'genomesch DNA séier ofzebauen) .

4. Ongerecht Lagerung vu Foregene Protease resultéiert an reduzéierter oder inaktivéierter Aktivitéit.

Recommandatioun: Bestätegt d'Späicherkonditioune vu Foregene Protease oder ersetzt se mat enger neier Foregene Protease fir enzymatesch Hydrolyse.

5. De Kit ass falsch gespäichert oder ze laang gespäichert, sou datt e puer Komponenten am Kit versoen.

Recommandatioun: Kaaft eng nei Planz genomesch DNA Extraktioun Kit fir verbonne Operatiounen.

6. Ongerecht Notzung vum Kit.

Virschlag: Kaaft e Plant DNA Isolation Kit gewidmet fir Proben fir Extraktioun a Reinigung vu Planzgenomesch DNA.

7. Buffer WB ouni dobäi engnhydrous Ethanol.

Recommandatioun: Vergewëssert Iech de richtege Volumen vun absoluten Ethanol op de Buffer WB ze addéieren.

8. D'Eluent gouf net korrekt op d'Silica-Membran getrëppelt.

Virschlag: Füügt de virgehëtzten Eluent op 65℃dropwise bis an d'Mëtt vun der Silicagel Membran, a léisst et bei Raumtemperatur fir 5 Minutten fir d'Elutiounseffizienz ze erhéijen.

Extraktioun fir niddereg-Ausbezuelung genomesch DNA ze kréien

1. D'Probe gëtt ongerecht gespäichert oder ze laang gespäichert, wat zu der Degradatioun vu genomesch DNA resultéiert.

Recommandatioun: Store Tissue Echantillon bei -20℃;probéiert nei gesammelt Tissueproben fir genomesch DNA Extraktioun ze benotzen.

2. Wann d'Quantitéit vun Tissueproben ze kleng ass, gëtt d'extraktéiert genomesch DNA manner.

Virschlag: E puer Planzenproben si reich u Waasser, wéi Waasserpflanzen wéi Algen, asw., d'Doséierung kann entspriechend erhéicht ginn oder d'Waasser kann e bëssen dehydréiert ginn virun der Operatioun.

3. D'Proben goufen net grëndlech mat flëssege Stickstoff gemoolt oder goufen no der Schleifen ze laang bei Raumtemperatur verlooss.

Virschlag: De flëssege Stickstoffschleifen muss genuch sinn, an d'Proufzellmauer soll sou vill wéi méiglech gebrach ginn;direkt nom Schleifen, sollt de Probepulver op 65 transferéiert ginn℃preheated Buffer PL1 fir déi nächst Schrëtt.

4. Net déi richteg Kit benotzt.

Empfehlung: Benotzt en dedizéierten Planz DNA Isolatioun Kit fir Planzgenomesch DNA ze extrahieren an ze purifizéieren.

5. Ongerecht Lagerung vu Foregene Protease resultéiert an reduzéierter oder inaktivéierter Aktivitéit.

Recommandatioun: Bestätegt d'Späicherkonditioune vu Foregene Protease oder ersetzt se mat enger neier Foregene Protease fir enzymatesch Hydrolyse.

6. Eluent Problem

Recommandatioun: Benotzt w.e.g. Buffer EB fir d'Elutioun;wann Dir ddH benotzt₂O oder aner Eluenter, vergewëssert Iech datt den pH vum Eluent tëscht 7,0-8,5 ass.

7. D'Eluent gëtt net richteg getrëppelt

Virschlag: Füügt w.e.g. d'Elutiounsdrop an d'Mëtt vun der Silica-Membran a léisst et bei Raumtemperatur fir 5 Minutten fir d'Elutiounseffizienz ze erhéijen.

8. D'Eluentvolumen ass ze kleng

Virschlag: Benotzt w.e.g. den Eluent fir genomesch DNA-Elutioun no den Instruktiounen, op d'mannst net manner wéi 100μl.

Extraitéiert genomesch DNA mat gerénger Rengheet

Déi geréng Rengheet vun der genomescher DNA féiert zum Versoen oder schlechten Effekt vun Downstream Experimenter, sou wéi: den Enzym kann net geschnidden ginn, an d'Zilgenfragment kann net duerch PCR kritt ginn.

1. Verschidde Proteinkontaminatioun, RNA Kontaminatioun.

Analyse: Buffer PW gouf net benotzt fir d'Kolonn ze wäschen;Buffer PW gouf net benotzt fir d'Kolonn mat der korrekter Zentrifugéierungsgeschwindegkeet ze wäschen.

Virschlag: probéiert ze garantéieren datt et kee Nidderschlag am Supernatant gëtt wann de Supernatant duerch d'Kolonn passéiert ass;gitt sécher d'Rengungskolonne mat Buffer PW no den Instruktiounen ze wäschen, an dëse Schrëtt kann net ausgelooss ginn.

2. Gëftstoffer Ion Verschmotzung.

Analyse: D'Buffer WB Wash Kolonn gouf ewech gelooss oder nëmmen eemol gewäsch, wat zu engem Rescht ionesche Kontaminatioun resultéiert.

Recommandatioun: Gitt sécher zweemol mat Buffer WB ze wäschen no den Instruktioune fir Rescht Ionen sou vill wéi méiglech ze läschen.

3. RNase Kontaminatioun.

Analyse: Exogen RNase gëtt an de Buffer bäigefüügt;falsch wäschen Operatioun am Buffer PW wäert zu Rescht RNase Resultat an Afloss downstream RNA experimentell Operatiounen, wéi in vitro Transkriptiouns.

Virschlag: Foregene Serie Nukleinsäure Extraktioun Kits kënnen RNA ouni zousätzlech RNase ewechhuelen, an all Reagenzen am Plant DNA Isolation Kit brauche keng RNase;gitt sécher d'Rengungskolonne mat Buffer PW no den Instruktiounen ze wäschen, an dëse Schrëtt kann net ausgelooss ginn.

4. Ethanol Reschter.

Analyse: Nom Wäschen vun der Reinigungskolonne mat Buffer WB gouf keng eidel Rouer Zentrifugéierung gemaach.

Recommandatioun: Follegt d'Instruktioune fir eng korrekt eidel Röhre Zentrifugatioun.

Bedienungsanleitung:

Plant DNA Isolation Kit Instruction Manual