Direkter RT-qPCR Kit III
Kit Beschreiwung:
◮Direkten RT-qPCR Kit, benotzt Foreasy Reverse Transcriptase an Foreasy HS Taq DNA Polymerase entwéckelt vu Foregene, mat eenzegaartege Reaktiounsbuffer, mécht dëse Kit mat staarker Resistenz a Kompatibilitéit, an et kann direkt Reaktioun testen benotzen Foregene Lysis System als Schabloun.Dëse Kit kann fir COVID-19 Nukleinsäure Detektioun Kit an aner pathogene Bakterien Nukleinsäure Detektioun Kit Entwécklung gëllen.
Beschreiwung
Direct RT-qPCR Kit bitt separat verpackte RT-qPCR Puffer (mat Foreasy HS Taq DNA Polymerase gemëscht) an héich effizientForeasy Reverse Transcriptase (MMLV),mécht et bequem fir Back-End Kits a System Upassung ze kreéieren, bannent einfacher Verifizéierung.
Direkten RT-qPCR Kit, benotzt Foreasy Reverse Transcriptase an Foreasy HS Taq DNA Polymerase entwéckelt vu Foregene, mat eenzegaartege Reaktiounsbuffer, mécht dëse Kit mat staarker Resistenz a Kompatibilitéit, an et kann direkt Reaktioun testen benotzen Foregene Lysis System als Schabloun.Dëse Kit kann fir COVID-19 Nukleinsäure Detektioun Kit an aner pathogene Bakterien Nukleinsäure Detektioun Kit Entwécklung gëllen.
Dëse Kit kann direkt de Bestanddeel vum IVD Produkt sinn, einfach a séier benotzt.Et brauch nëmmen eng einfach Verifizéierung, ouni sech erëm z'entwéckelen.
Spezifikatioune
500T, 50.000T
Kit Komponente
| Kit Inhalt (20 μL Reaktiounssystem) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Foresch Reverse Transkriptase(200 U/μL) | 50 μl× 1 | 1ml vun× 5 |
| 2 × Direkter qPCRMix-Taqman | 1 ml x 5 | 500 ml× 1 |
| Uweisunge | 1 | 1 |
Operatioun Schrëtt
A: Preparéieren vun Schabloun a Reagens
1. Preparéieren preparéiert RNA Schabloun (Et ass recommandéiert Foregene Total RNA Isolatioun Kit Serie Kit ze benotzen fir RNA Schabloun ze extrahieren an ze purifizéieren) oder Prouf knacken Produit (Et ass recommandéiert Foregene Lysis System ze benotzen), spezifesch primers (10 μM) an aner relevant consumables, Instrument.
2. Setzt den 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O an 20× ROX Reference Dye (wann et néideg ass) an d'Këscht mat Äis, sou datt dës natierlech schmëlzen, a sanft gemëscht ginn.
B: Preparéieren vun RT-qPCR System
Kritt d'Halschent vum Volume vum Reaktiounsbuffer vum Reaktiounssystem (zum Beispill, wann de Volume vum System 20 μL ass, muss et 10 μL 2 × Direct RT-qPCR Buffer kréien). Firentspriechend Quantitéit un Enzym, mir proposéieren datM-MLV: 10-30 U/20 μL Reaktiounssystem,TaqDNA Polymerase:1-2 U / 20 μL Reaktioun Systemdëst ass eise Virschlag, Dir sollt et testen an upassen), add RNA Template, spezifesch Primer a Sonden, a füügt RNase-Free ddH2O bis 20 μL.Déi spezifesch Virbereedung vum RT-qPCR Reaktiounssystem kann op déi folgend Tabell 1 bezeechent ginn.
Dësch 1: Preparéieren vun RT-qPCR System
| Komponent | Volumen | Finale Konzentratioun |
| 2 × Direkter RT-qPCR Buffer | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 Uhr u | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 U | |
| Forward Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Sonde (4 μM) | 1 μl | 200 nM |
| Schabloun (RNA oder Lysat) | X μL | |
| 20 × ROX Referenz Dye | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μL | |
| Gesamtvolumen | 20 μL |
Notiz: Forward Primer a Reverse Primer si spezifesch Primer vum Zilgen.De System vun der qPCR kéint no praktesch experimentell an PCR Modeller ugepasst ginn.Mir recommandéieren 400nM fir d'Finale Konzentratioun vun de meeschte Primer.Ajustéiert de Volume vu spezifesche Primer a Sonden no der preparéierter Konzentratioun an der recommandéierter Endkonzentratioun, w.e.g.
1 *: Wielt gëeegent Finale Konzentratioun vun ROX Referenz Dye no verschiddene quantitative PCR Instrumenter.Déi optimal ROX Referenz Dye Konzentratioun vu gemeinsame quantitative PCR Instrumenter gëtt an der Tabell folgenderweis gewisen:
| Quantitative PCR Instrumenter | Finale Konzentratioun vun ROX Referenz Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One,etc. | 1 × (zum Beispill, add 1μl 20 × ROX Referenz Dye am 20 μL Reaktiounssystem) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P an Mx4000, etc. | 0,5 × (zum Beispill, add 0,5 μl 20 × ROX Referenzfaarf am 20 μL Reaktiounssystem) |
| Roche PCR Instrument, Bio-Rad PCR Instrument, Eppendorf quantitative PCR Instrument, etc. | Ouni ROX Referenz Dye |
Stockage an Regal Liewen
De Kit soll bei -20 ± 5 ℃ gespäichert ginn.Et soll direkt am -20 ℃ thermostatesche Frigo gespäichert ginn.D'Gëltegkeetsperiod ass 2 Joer wann et an engem gëeegente Zoustand gelagert gëtt.
